多重PCR法用于畜肉源性鉴定的研究

根据Genebank中猪、牛、羊的线粒体细胞色素b(Cyt-b)基因序列,设计了猪、牛、羊的通用上游引物和特异性下游引物,通过调节引物比例、反应体系、反应条件以及模板量等优化实验确立了多重PCR检测方法.研究结果显示,该多重PCR方法能够同时扩增样品中猪、牛、羊成分,对混合样品的检出限可达10％;并将该方法用于成都市猪、牛、羊肉的调查研究,得到了理想的结果.     

海狸鼠源性成分的PCR鉴别研究

以海狸鼠和其他物种的细胞色素b基因为目标基因,通过序列比对在碱基差异明显的区域设计海狸鼠的特异性引物,并通过退火温度、反应循环数、方法检出限和特异性等参数的考察建立海狸鼠源性成分的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴别方法。结果显示:该PCR方法对海狸鼠能够扩增出约599 bp的条带,对其他物种无任何扩增现象,且在鸡肉和兔肉中对海狸鼠成分的检出限可达到0.1%。这表明该方法有较好的特异性和较高的灵敏度,能够满足海狸鼠源性成分的检测要求。     

MIRA-LFD鉴别肉制品中鸭源性成分的方法研究

传统的肉制品动物源性成分检测对检测人员操作水平及试验条件等方面要求较高,不适于基层检测需要。多酶恒温快速扩增技术（multienzyme isothermal rapid amplification,MIRA）是一种新型的核酸扩增方式,整个反应在37℃条件下即可完成,相比昂贵的聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）仪器,检测成本以及试验条件要求明显降低。该研究通过结合多酶恒温快速扩增技术与侧向流层析技术（lateral flow dipstick,LFD）,建立一种鸭源性成分多酶恒温侧流式扩增技术（MIRA-LFD）的快速检测方法,并对其特异性、检出性以及应用的可行性进行评价。     

肉及肉制品中牦牛源性成分的PCR鉴别

通过牦牛与其他常见物种的细胞色素b基因序列进行比对,设计牦牛的特异性引物,并进行聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)体系中不同条件、参数的考察,建立肉及肉制品中牦牛源性检测的PCR方法。该方法具有较好的专属性,建立的PCR体系仅对牦牛源性有扩增现象,而对其他物种无扩增,且对牦牛源性的检出限可达到1%。能够满足检验机构或生产企业对肉及肉制品中牦牛源性的检测需求。     

多重PCR法用于鸡、鸭肉源性的鉴定

在PCR方法对肉质源性的鉴定中,大多数的研究都针对猪、牛、羊肉之间的鉴别,而对禽肉中鸡、鸭肉的鉴别研究较少。本研究在Cyt-b(细胞色素b)基因序列上确定了鸡肉和鸭肉的特异性引物,并进行了相应引物比例的PCR扩增,能够同时扩增样品中所含的鸡肉和鸭肉成分,可检测出混合样品中鸡、鸭肉的比例最低为10%。并将扩增产物进行测序比对,也进一步验证了PCR结果的准确性。该方法不仅缩短了检测时间,同时提高了检测的效率及结果的准确性,完全能够满足对市场上鸡、鸭肉的成分检测。     

小麦和榛子过敏原成分检测的实时荧光PCR方法

过敏原风险问题已成为重要的食品安全问题,如何快速准确地检测出食物中的过敏原成为当前亟需解决的关键。目前常用的过敏原检测方法有免疫学检测、质谱及SPR等技术,但这些方法均有一定程度的局限性。通过引入分子生物学鉴定手段,建立小麦、榛子的过敏原基因数据库,并依据数据库寻找特异性序列并设计探针引物,建立一种快速、便捷、高效的过敏原检测方法,并适当调整了方法的检出限,降低了检测误判的风险。通过建立实时荧光PCR方法,可快速筛选样品的过敏原基因,简化了食品中过敏原成分的鉴定,降低了实验成本与技能要求,降低了检测的难度,缩短了实验时间。通过适用性验证与检出限验证实验,该方法用于过敏原成分鉴定可以达到理想的效果,重复性好,准确率高,检出限为1%。