基于核酸适配体和G-四链体免标记荧光分析法检测氯霉素

目的 基于核酸适配体和G-四链体(G-quadruplex,G4)结构建立一种免标记荧光分析法检测氯霉素(chloramphenicol, CAP)含量,应用于化学分析、环境检测、食品安全等领域。方法 G4探针和适配体(aptamer,AP)在Tris-HCl缓冲液中合成,由于G4探针与适配体的结合抑制了G4的形成,N-甲基卟啉二丙酸IX(N-methylmesoporphyrin IX, NMM)染料无法被G4结构增强,荧光强度较弱,加入CAP竞争结合适配体,使得G4探针结构改变,通过荧光强度产生的变化分析样品中的CAP含量。围绕G4检测探针进行系列优化,包括探针序列、Tris-HCl缓冲液体系中钾离子和镁离子浓度、G4探针浓度与AP浓度比例。结果 当CAP质量浓度在1～10ng/mL时,体系的荧光强度增长值(Y)与CAP质量浓度(X)呈线性关系,线性方程为Y=59.091X+1.733(r2=0.9939)。根据3倍相对标准偏差(3σ/K,n=11)计算该方法 检出限,为0.518ng/mL。本方法 对卡那霉素、链霉素和庆大霉素无荧光响应,具有良好选择性和特异性。结论 本方法 重复...