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文章旨在建立一种可同时快速检测食品中沙门氏菌和副溶血弧菌的TaqMan双重荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, PCR)检测方法。分别针对沙门氏菌的inv A基因和副溶血弧菌的tlh基因序列的保守片段,设计了特异性检测引物和探针,并优化其使用浓度及反应退火温度,建立双重荧光定量PCR检测体系,并对方法的灵敏度、特异性及稳定性进行评估。结果显示:建立的双重荧光定量PCR检测法可特异性扩增沙门氏菌和副溶血弧菌,其他菌株无扩增。沙门氏菌检测灵敏度最低检测值可达1 copies/μL,副溶血弧菌检测灵敏度为10 copies/μL。批内批间变异系数均<2%,重复性和稳定性较好,与传统方法检测结果一致,检测时长大幅度缩短。综上表明,建立的双重荧光PCR检测方法能够快速、准确地检测出食品中沙门氏菌和副溶血弧菌,为食品中食源性致病菌的快速检测提供技术支持。 相似文献
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目的探讨苏木精染色对冰冻切片组织RNA及蛋白质浓度和质量的影响。方法将10份乳腺癌组织冰冻切片进行苏木精染色以及苏木精染色后酸洗处理,利用显微切割技术从冰冻切片中获取特定乳腺癌细胞,Trizol提取相应的RNA及总蛋白,琼脂糖凝胶电泳和RT-PCR分析RNA质量,SDS-PAGE和Bandscan软件分析蛋白质电泳结果,并进行RNA和蛋白质的浓度测定。结果从10份乳腺癌组织冰冻切片中提取的RNA经琼脂糖凝胶电泳检测,苏木精染色组和苏木精染色后酸洗组的28S、18S、5S条带均有不同程度的降解,RT-PCR结果显示,RNA完整性较好;提取的蛋白电泳图谱处理前后无明显差异;苏木精染色以及苏木精染色后酸洗处理对乳腺癌组织中的RNA及蛋白质浓度无显著影响。结论苏木精染色对乳腺癌冰冻切片组织中RNA及蛋白质浓度和质量无显著影响,为肿瘤蛋白质组学的进一步研究提供了理论支持。 相似文献
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动物性食品作为人类饮食结构中的重要组成部分,却极易受到食源性致病菌污染,给人类健康造成重大威胁。由于动物性食品生产环节繁多,使得污染预防困难重重,因此动物性食品中食源性致病菌检测是预防和控制动物性食品安全问题的重要环节。文章从技术特点、适用范围等方面综述了动物性食品中食源性致病菌的检测技术。在对传统方法和新兴技术的比较与分析过程中,结合当前动物性食品问题现状和食源性致病菌检测需求,对相关技术发展方向提出展望,以期为动物性食品中食源性致病菌检测相关研究提供理论参考。 相似文献
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目的探讨RNA保护剂对乳腺癌组织DNA及核蛋白丰度和质量的影响,为深入研究乳腺癌基因转录调控奠定基础。方法将临床摘除的乳腺癌新鲜组织放入RNA保护剂内浸泡过夜后,分别于-20℃保存及-80℃超低温冷冻保存。提取相应的DNA及核蛋白,进行浓度测定,通过琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量,SDS-PAGE检测核蛋白的质量,并经Bandscan软件分析蛋白质电泳结果。结果经RNA保护剂处理的乳腺癌组织提取的DNA和核蛋白的浓度明显高于-80℃超低温冷冻保存组织提取的DNA和核蛋白浓度,两种保护剂保存的乳腺癌组织提取的DNA浓度差异无显著意义。但RNA保护剂处理组与-80℃超低温冷冻处理组相比,在相对分子质量66200和31000处的蛋白含量有明显差异。结论RNA保护剂对乳腺癌组织的DNA浓度及核蛋白的浓度和质量有明显影响。 相似文献
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