体外模拟胃肠道对鲫鱼卵唾液酸糖蛋白的降解作用

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白(sialoglycoprotein from Carassius auratus eggs,Ca-SGP)是从鲫鱼卵中筛选分离出的一种新型唾液酸糖蛋白,具有改善骨代谢、调节免疫力等功效。然而Ca-SGP属于大分子质量(195.35 kDa)物质,其如何通过胃肠道被降解并利用的仍不清楚。本实验旨在研究胃肠液及大肠肠道菌群对Ca-SGP的降解作用,以期为深入探索Ca-SGP作用机理提供参考。本实验以唾液酸糖蛋白为研究对象,采用体外静态胃肠模拟系统,通过检测不同阶段的产物分子质量、pH值、唾液酸含量及还原糖质量浓度来研究胃肠液及大肠肠道菌群对Ca-SGP的降解作用。结果表明:经过胃肠道消化后Ca-SGP的分子质量减小,唾液酸含量减少,还原糖质量浓度增加,说明胃肠液对Ca-SGP有一定的降解作用,Ca-SGP糖链末端的活性因子唾液酸能够在胃肠消化酶的作用下发生脱落;Ca-SGP经过肠道菌群发酵后,分子质量不断减小,还原糖质量浓度降低,说明Ca-SGP能够不断被微生物发酵并且利用,发酵后溶液pH值呈现逐渐下降趋势,推测可能与产生短链脂肪酸等酸性物质有关。提示胃肠液对Ca-SG...     

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用

从鲫鱼卵中提取唾液酸糖蛋白,并探讨其对免疫功能低下小鼠免疫功能的作用。Balb/c小鼠连续皮下注射氢化可的松造成免疫功能低下模型,以不同剂量的鲫鱼卵唾液酸蛋白灌胃28d后,分别测定小鼠的抗体产生水平、T细胞免疫功能、非特异性免疫功能和血清IFN-γ/IL-4。结果显示,高剂量的鲫鱼卵唾液酸糖蛋白能显著升高免疫低下小鼠的血清溶血素水平(p0.01)和抗体细胞生成数(p0.01),增强脾淋巴细胞增殖能力(p0.01)和迟发型变态反应(p0.05),显著提高腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数(p0.01),改善碳廓清能力(p0.05)并升高血清中IFN-γ/IL-4水平(p0.01)。说明鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对免疫功能低下小鼠具有显著的免疫调节作用。     

乙酯型鱼油对小鼠骨性关节炎的改善作用

目的：研究乙酯型鱼油（fish oil,FO）对骨性关节炎小鼠软骨退变的改善作用。方法：9 周龄雄性C57BL/6J小鼠构建内侧半月板不稳骨性关节炎模型。术后8 周,随机分成假手术组、模型对照组、阳性对照组和FO低、高剂量组。每天灌胃1 次,持续灌胃60 d后,取关节软骨组织行苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色及实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR）分析。结果：苏木精-伊红和甲苯胺蓝染色分析表明FO能够显著改善软骨结构,维持软骨基质的稳定。qPCR结果表明,FO能显著提高Acan、Col2α1的mRNA表达,维持软骨细胞正常表型;抑制Col10α1、Runx-2、Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达,抑制软骨细胞的肥大分化及异常凋亡。同时,FO能够显著降低mTOR的mRNA表达,提高LC-3B和ATG-5的mRNA表达,促进自噬进程,维持软骨的稳态。结论：FO能够通过激活软骨细胞自噬进程来抑制骨性关节炎小鼠的软骨退变进程。     

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用

目的：从鲫鱼卵中提取唾液酸糖蛋白,研究其对去卵巢大鼠骨质疏松症的改善作用,并探究其作用机理。方法：采用切除大鼠双侧卵巢的方法建立骨质疏松症大鼠模型,灌胃鲫鱼卵唾液酸糖蛋白（400 mg/（kg·d））90 d后,分别检测大鼠尿液骨吸收指标（脱氧吡啶啉、钙、磷）、血清骨吸收指标（抗酒石酸酸性磷酸酶、组织蛋白酶K）、血清骨生成指标（骨源性碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型前胶原羧基端前肽）以及血清骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、核因子κB受体活化因子（receptor activator for nuclear factor-κB,RANK）、核因子κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）含量。结果：鲫鱼卵唾液酸糖蛋白能显著降低骨质疏松症大鼠尿液脱氧吡啶啉（P＜0.01）、钙（P＜0.01）、磷（P＜0.01）含量和血清抗酒石酸酸性磷酸酶（P＜0.01）、组织蛋白酶K（P＜0.01）活性,防止大鼠骨吸收;显著降低血清骨源性碱性磷酸酶（P＜0.01）活性和骨钙素（P＜0.01）、Ⅰ型前胶原羧基端前肽（P＜0.01）含量,抑制大鼠高骨转换速率;显著上调OPG（P＜0.01）含量,下调RANKL（P＜0.01）含量,降低RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞增殖分化,降低骨吸收。结论：鲫鱼卵唾液酸糖蛋白具有改善去卵巢大鼠骨质疏松症的作用,其作用机理可能与下调RANKL/OPG比值有关。     

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对SAMP6小鼠骨丢失的保护作用

本文研究了鲫鱼卵唾液酸糖蛋白(Sialoglycoproteins of Carassius auratus eggs,Ca-SGP)对SAMP6小鼠骨丢失的保护作用。以雄性SAMP6小鼠为老年性骨质疏松症动物模型,连续灌胃Ca-SGP 150d后,检测血清骨代谢生化标志物,测定小鼠股骨矿化沉积率、胫骨骨密度及松质骨微结构。结果显示,经Ca-SGP(500mg/kg·bw)干预后,小鼠血清中骨生成标志物骨源性碱性磷酸酶的活性和I型前胶原羧基端前肽、骨钙素的含量得到显著升高(p0.01),骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶和组织蛋白酶K的活性得到显著抑制(p0.01);胫骨骨密度提高10.92%(p0.01);松质骨骨体积分数、骨小梁数目及厚度均得到显著增加(p0.01),骨小梁间隙显著缩小(p0.01);骨矿化沉积率提高98.87%,差异显著(p0.01)。该研究表明Ca-SGP可改善老年性骨质疏松症小鼠低骨转换,提高骨密度,改善骨小梁结构,促进骨矿化,为开发抗骨质疏松症药物和功能食品提供了理论支持。     

海参蒸煮液干粉对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的预防作用

目的:探究海参蒸煮液干粉(SCCL)对小鼠急性肝损伤的预防作用。方法:采用腹腔注射体积分数为5%的CCl4玉米油溶液,建立急性肝损伤小鼠模型,检测SCCL对小鼠血清、肝脏中抗氧化酶、氧化产物的影响;H&E和8-OH dG免疫组化染色观察小鼠肝脏组织病理学变化;qRT-PCR法测定肝组织Nrf2、Keap-1、HO-1、NQO-1 mRNA的表达情况。结果:相较于模型组,SCCL组小鼠的血清、肝脏中抗氧化酶活力显著上升,蛋白质、脂质氧化产物含量显著减少;小鼠肝组织形态明显改善;Nrf2、Keap-1、HO-1、NQO-1 mRNA表达显著增加。结论:SCCL通过增强肝损伤小鼠的抗氧化能力,抑制机体氧化应激,改善了CCl4诱导的急性肝损伤。     

磷酸化南极磷虾肽调控Wnt/β-连接蛋白通路改善大鼠骨质疏松症

目的:研究磷酸化南极磷虾肽(PP-AK P)对双侧去卵巢骨质疏松症模型大鼠的改善作用及其机制。方法:采用双侧卵巢切除法建立骨质疏松症大鼠模型,将SD大鼠随机分为5组:假手术组(生理盐水)、模型对照组(生理盐水)、阳性对照组【阿伦磷酸钠1 mg/(kg·d)】和磷酸化南极磷虾肽低、高剂量组【400,800 mg/(kg·d)】,灌胃12周后,分别检测血清骨代谢相关指标、骨密度及骨组织形态学;测定Wnt/β-连接蛋白信号通路关键基因m RNA和蛋白的表达。结果:磷酸化南极磷虾肽能显著下调去卵巢骨质疏松症大鼠血清中骨源性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OCN)和骨形态发生蛋白(BMP-2)的分泌(P0.01),降低血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和I型胶原羧基端交联肽(CTX-I)水平(P0.01),降低去卵巢大鼠骨代谢的高转换率;显著提高模型大鼠股骨骨密度(P0.01),并能显著增加骨小梁厚度和面积,降低骨小梁间距,改善骨组织微观结构;q RT-PCR检测结果表明,磷酸化南极磷虾肽能显著降低LRP-5b、β-连接蛋白、RUNX2、OSX m RNA的表达水平;免疫印迹检测结果表明,磷酸化南极磷虾肽能显著降低LRP-5b、β-连接蛋白总蛋白、β-连接蛋白核蛋白及RUNX2蛋白的表达。结论:南极磷虾肽能显著改善双侧去卵巢大鼠骨质疏松症,其作用机制与下调Wnt/β-连接蛋白通路,降低骨质疏松症大鼠高骨转换速率有关。     

虾青素酯对饲喂高脂高果糖饲料诱导的小鼠慢性炎症的影响

研究了虾青素酯对高脂高果糖饲料（high-fat high-fructose diet,HFFD）饲喂的小鼠慢性炎症的影响。采用高脂高果糖饲养的方法建立慢性炎症小鼠模型,雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组（低脂低糖饲料）、模型对照组（HFFD）、阳性对照组（HFFD+虾青素,6.32mg/kg bw·d）、虾青素酯高剂量组（HFFD+虾青素酯,60.45mg/kg bw·d）、虾青素酯低剂量组（HFFD+虾青素酯,20.15mg/kg bw·d）。连续灌胃60d后,称重小鼠白色脂肪重,检测空腹血糖、葡萄糖耐受量、血清胰岛素水平、血清促炎症因子[游离脂肪酸（FFA）、一氧化氮（NO）、活性氧簇（ROS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素6（IL-6）、白介素1β（IL-1β）、C-反应蛋白（CRP）]及血清炎症抑制因子[脂联素（ADPN）、白介素10（IL-10）]的含量。实验结果表明:虾青素酯能有效的降低慢性炎症小鼠的脂肪积累、空腹血糖及血清胰岛素含量（p<0.05,p<0.01）,改善糖耐量及胰岛素抵抗（p<0.01）;显著降低血清中促炎症因子FFA、NO、ROS、TNF-α、IL-6、IL-1β、CRP的含量（p<0.01）,显著提高炎症抑制因子ADPN、IL-10水平（p<0.01）。虾青素酯可显著改善小鼠的慢性炎症反应,作用机制可能与其调节炎症相关因子水平有关。      

南极磷虾油对骨质疏松模型小鼠骨折愈合的促进作用

目的：探究南极磷虾油（Antarctic krill oil,AKO）对骨质疏松模型小鼠骨折愈合的促进作用。方法：采用C57BL/6J雌性小鼠,通过双侧去卵巢术建立骨质疏松模型;随后行右胫开放性骨折手术并随机分为一般性骨折对照组、骨质疏松性骨折模型组、阳性对照组、AKO组。于骨折后5、11、24、35、56 d取材,动态分析AKO对小鼠血清相关指标、骨痂组织形态学、显微结构和生物力学以及软骨内成骨关键基因表达的影响。结果：酶联免疫吸附测定结果表明AKO能显著升高血清中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）质量浓度及骨碱性磷酸酶活力;骨痂苏木精-伊红染色及微型计算机断层扫描结果显示AKO能够促进软骨痂向硬骨痂转化,并改善骨痂微结构,加速骨痂重塑;生物力学检测结果显示AKO可增强骨性骨痂生物力学性能;实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示,AKO可显著提高血管入侵相关因子（VEGF、血小板衍生生长因子和血管紧张素1）的mRNA表达（P＜0.05）,显著降低软骨细胞增殖和肥大相关基因（聚集蛋白聚糖A g g r e c a n和Col10a）的表达（P＜0.05）,显著升高软骨基质降解因子MMP-13以及骨生成相关基因（Col1a、骨钙素和骨形态发生蛋白2）的表达（P＜0.05）,提示AKO可通过调控软骨内成骨关键基因的表达,加速软骨内骨化进程。结论：AKO通过促进软骨内成骨及骨痂重塑,加速骨质疏松模型小鼠骨折愈合,提高愈合质量。