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以生物信息学为基础,分析D-乳酸脱氢酶(D-LDH)的保守氨基酸残基、活性中心氨基酸残基、蛋白质三维结构和同源建模,可视化比较建模突变体空间构象,优选最佳突变体模型。结果显示,在D-LDH的20个保守氨基酸中,4个与酶活性中心有关。比较突变体模型发现,49和297位的phe或try的苯环形成空间位阻,F49A或Y279A及F49A和Y279A双突变体可解除位阻。对已构建的三个突变体初步发酵显示,IPTG和乳糖都能诱导突变体酶在大肠杆菌中产生苯乳酸,静置培养比摇振培养产量高,用乳糖诱导时,突变体F49A(A.a D-LDH-F49A株)苯乳酸的量比野生型(A.a.D-LDH株)的高。优选可视化突变体可作为高效构建工程菌的方法之一。 相似文献
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