珍珠母肽酶解工艺的优化及对人肝癌细胞HepG2能量代谢的影响

该研究以水解度为指标,仿生酶用量、提取时间、提取温度为条件因素,设计Box-Behnken响应方案,对珍珠母肽酶解条件进行优化;同时研究其不同质量浓度的珍珠母肽对HepG2肝癌细胞的抑制作用的影响。最佳酶解工艺条件为：温度55 ℃,调节pH值为2.0,加入胃蛋白酶质量分数1%,酶解2.6 h后,pH值调节为8.0,加入胰蛋白酶质量分数1.7%,酶解3 h,此时珍珠母肽水解度为31.21%;基于此酶解条件获得珍珠母肽进行对肝癌细胞抑制作用,研究实验结果显示不同质量浓度珍珠母肽（12.5、25、50、100、200 μg/mL）与氯化钴（CoCl2）诱导的HepG2肝癌细胞缺氧模型相比较,均可抑制细胞存活率,珍珠母肽中氨基酸结果显示,精氨酸可能参与抑制肝癌细胞增殖,从能量代谢的角度说明珍珠母肽可通过减少三磷酸腺苷的生成和降低乳酸、己糖激酶、丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶能量代谢关键酶活力达到抑制HepG2细胞增殖的目的,可为珍珠母肽的制备工艺提供参考,为其开发利用提供一定的理论基础。     

运用液质联用与分子对接技术筛选黄精中抑制血管紧张素转化酶活性成分

采用液质联用(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,LC-MS)和分子对接技术筛选黄精中抑制血管紧张素转化酶(ACE)的活性成分。以血管紧张素转化酶(ACE)为靶标,确定黄精中ACE抑制部位,应用超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱技术(UPLC-Q-ExactiveMS)鉴定潜在抑制ACE活性成分,应用分子对接技术进一步对潜在抑制ACE活性成分进行验证。结果发现黄精乙酸乙酯部位体外ACE抑制率最高,ACE抑制率的IC₅₀为1.174 mg/mL,通过对黄精乙酸乙酯部位进行液质分析,共鉴定出30个化合物,包括正离子模式下的Tianshic Acid、Cimicifugic Acid E、Brucine、Polygonatine B、Kingianoside B等15个化合物,负离子模式下的N-Trans-Pcoumaroyloctopamine、Pseudolaric Acid、Isomer of 25R,22S-Hydroxylwattinoside C、Skullcapflavone I、3,3′,7-Trimeth...     

牡蛎蛋白酶解肽制备工艺优化及其对小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌和氧化应激的影响

为探究牡蛎在药食同源领域的研究与开发,本实验采用响应面法优化牡蛎蛋白酶解肽酶法制备工艺,并研究其对小鼠睾丸间质细胞睾酮分泌和氧化应激的影响。以水解度为考察指标,采用仿生酶解法,在单因素实验的基础上,根据响应面分析法优化牡蛎蛋白酶解肽的制备工艺。同时构建过氧化氢（H2O2）诱导的小鼠睾丸间质细胞（TM3）氧化损伤模型,通过细胞存活率、DAPI染色、睾酮（Testosterone,T）分泌量,超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量研究牡蛎蛋白酶解肽对TM3细胞睾酮分泌和氧化应激的影响。结果表明：牡蛎蛋白酶解肽的最佳酶解条件为：料液比1:10 g/mL、胃蛋白酶量为1.1%、酶解时间为1.0 h、胰蛋白酶量为2.1%、酶解时间3.1 h,此条件下的水解度为39.43%±0.42%。牡蛎蛋白酶解肽对H2O2诱导的TM3细胞均有不同程度的增殖活性,可显著（P<0.05）增加TM3细胞睾酮分泌量、SOD酶活力和降低（P<0.05）MDA含量,并且在牡蛎蛋白酶解肽物质量浓度为200μg/mL时效果最好。综上所述,响应面法优化酶解工艺有效可行,牡蛎蛋白酶解肽可极显著的促进TM3...     

人参活性成分及药理作用研究进展

研究从人参炮制品生晒参、红参、黑参中筛选出具有抗炎作用的蛋白酶解肽并进行对比分析。采用低温浸提法从三种炮制品中提取人参不同炮制品蛋白,采用分步酶解法,利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶对三种人参蛋白进行酶解,得到BGP（黑参蛋白酶解肽）、RGP（红参蛋白酶解肽）、SGP（生晒参蛋白酶解肽）三种酶解产物;使用超滤膜进行分离,分别得到不同分子量的超滤组分。通过建立脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7炎症模型确定了具有最强抗炎活性的组分。酶联免疫法测定活性组分对RAW264.7细胞分泌一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（(IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）的影响。分析三种蛋白酶解肽的氨基酸组成及含量。采用多元统计分析筛选出人参三种炮制品的差异性氨基酸并探究其与抑制RAW264.7细胞分泌细胞因子之间的关系。结果表明,人参三种炮制品蛋白酶解肽小于1 kDa组分较其他组分相比,对RAW264.7细胞增殖的作用最强且在质量浓度为50~200 μg/mL时可显著抑制NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌（P<0.05）。质量浓度为200 μg/mL时,三种蛋白酶解肽给药组对细胞因子释放的抑制作用最强,且BGP-4对细胞因子释放的抑制作用高于RGP-4和SGP-4,具有显著差异（P<0.05）。三种蛋白酶解肽均含有17种氨基酸,但含量存在明显差异。其中,苯丙氨酸含量最高且为三种人参炮制品差异氨基酸与抑制炎症因子的分泌密切相关。本研究初步探讨了炮制对人参抗炎活性的影响,并筛选出不同炮制品的差异性氨基酸,为人参炮制品的加工提供了参考依据。