重组酶介导扩增技术快速检测水产品中副溶血性弧菌

目的 建立重组酶介导扩增技术（RAA）快速检测副溶血性弧菌的方法。方法 本研究根据副溶血性弧菌（vibrio parahaemolyticus）tlh 基因序列设计特异性引物,经引物筛选,建立副溶血性弧菌的重组酶等温扩增（recombinase aidamplification, RAA）的快速检测方法。结果 该方法在25 ℃-43 ℃条件下,30 min即可观察到检测结果。特异性试验结果表明RAA方法检测副溶血性弧菌与其他弧菌属菌种不存在交叉反应,灵敏度试验分析结果表明RAA方法检测副溶血性弧菌检出限为5.3×101 CFU/mL。用100份样品验证RAA方法的可靠性,结果显示RAA方法和传统划线方法结果符合率为100%,表现出高度一致性。结论 本研究建立的RAA检测方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速等优点,为水产品中副溶血性弧菌的检测提供了新的发展方向。     

空肠弯曲菌中规律成簇间隔短回文重复序列（CRISPR）的检测与结构分析

规律成簇间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR）是近年在原核生物中发现的针对噬菌体等外源遗传物质的干扰而进化出的获得性和可遗传性生物免疫系统。因其序列的高度多态性及携带遗传信息的可追溯性,成为分子分型方法的理想位点。本研究对江苏地区分离的86?株空肠弯曲菌基因组进行CRISPR结构的检测和分析。结果表明：36%的菌株基因组含有CRISPR结构,32?株含有确定CRISPR结构的菌株均只含有1?个CRISPR结构,CRISPR序列长度范围为92～366?bp;重复序列与数据库中出现频率最高的重复序列一致;识别到的间隔序列共111?条,共分为17?种类型,有10?种类型的间隔序列与CRISPR?DB数据库中公布的一致,有7?种间隔序列为新报道的间隔序列,共55?条,占总间隔序列的49.5%。通过同源性比对发现,间隔序列除与来自同属同种的质粒或噬菌体具有同源性外,有些还与其他致病菌的质粒或噬菌体具有同源性,这种现象说明空肠弯曲菌与其他致病菌可能存在基因的水平转移等信息交流方式。另外,通过CRISPR结构间隔序列的多样性,可以将38?株空肠弯曲菌野生菌株分为5?种不同的谱型。研究结果为空肠弯曲菌利用CRISPR结构进行分型和溯源提供数据基础。     

不同贮藏温度下巴氏杀菌乳细菌多样性研究

采用Illumina MiSeq高通量扩增子测序技术,对巴氏杀菌乳在10、15、25℃贮藏温度下细菌多样性进行分析。研究贮藏过程中巴氏杀菌乳中细菌群落结构演替,并比较不同贮藏温度下巴氏杀菌乳中细菌的群落组成及相关预测功能的差异。结果表明,3个温度条件下巴氏杀菌乳在贮藏前期,多样性指数基本恒定,可培养的菌落总数维持在2～3 lgCFU/mL,此阶段优势菌属为不动杆菌属(Acinetobacter)和肠杆菌属(Enterococcus);随着贮藏时间的延长,细菌多样性下降,25℃贮存下降最快,10℃最慢,芽胞杆菌属(Bacillus)逐渐成为优势菌属,与此同时,菌落总数也在快速增加。Tax4Fun法分析代谢功能图谱发现在细胞新陈代谢、遗传信息加工和环境信息处理等丰度较高,且在贮藏过程中均有不同程度的变化。各项结果表明,巴氏杀菌乳在温度失控条件下贮存货架期快速缩短,芽胞杆菌属可能是导致腐败的主要原因。该研究可为巴氏杀菌乳贮藏过程中细菌群落变化研究及品质控制提供参考。     

陕西省部分地区零售肉中沙门氏菌和奇异变形杆菌Ⅰ类整合子检测与耐药分析

采用PCR技术检测2007-2008年分离于陕西省的443份零售肉中63株沙门氏菌和29株奇异变形杆菌Ⅰ类整合子,得到其在菌株中的流行情况;使用限制性内切酶酶切和DNA序列分析技术确定Ⅰ类整合子所携带的耐药基因盒;采用国家临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的琼脂稀释法测定Ⅰ类整合子阳性菌株对14种抗生素的药敏性。结果表明：10株(16%)沙门氏菌含有Ⅰ类整合子,其大小主要为1281bp和1842bp两种类型,携带的耐药基因分别为IntI1-blaPSE-1和dhfrXII-orf-aadA2;7株(24%)变形杆菌含有Ⅰ类整合子,主要为1123、1526、1590bp 3种类型,携带的耐药基因分别有IntI1-blaPSE-1、aadB-aadA2和dfr17-aadA5。分离自陕西省零售肉中携带有多种Ⅰ类整合子的沙门氏菌和奇异变形杆菌均为多重耐药株,耐药基因分别介导对氨基糖苷类、β-内酰胺类和甲氧苄氨嘧啶类抗生素的抗性。奇异变形杆菌中Ⅰ类整合子检出率比沙门氏菌高,且种类较为丰富。     

即食果蔬中食源性致病菌风险评估的研究进展

即食果蔬在生产、加工及消费过程中易受致病菌污染而导致食源性疾病的发生,因此即食果蔬的安全问题应当引起重视。该文对近年来国内外与即食果蔬中沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和致病性大肠埃希氏菌相关的风险评估研究进展进行了综述,并总结食源性致病菌风险评估中存在的问题,展望了未来即食果蔬中微生物风险评估的发展前景,为更好地开展食源性疾病监测和食源性致病菌风险评估提供参考。     

上海进口水产品中副溶血性弧菌耐药性、毒力基因和遗传特征

为研究上海进口水产品中副溶血性弧菌的耐药性、关键毒力基因携带情况以及遗传进化关系，为其科学预警和溯源提供数据支持，针对2017—2019年从上海口岸进口水产品中分离的68?株副溶血性弧菌，分析其抗生素敏感性、关键毒力基因携带情况和多位点序列分型。副溶血性弧菌对氨苄西林耐药率最高（98.53%），对其余抗生素耐药率相对较低，对左氧氟沙星和氯霉素均敏感。对9?种抗生素中介耐药，其中氨基糖苷类、哌拉西林、环丙沙星和头孢西丁中介耐药率较高。20.59%菌株耐2?种及以上抗生素。发现1?株携带trh，均不携带tdh。共鉴定出65?种ST型，其中52?种为新发现ST型。未发现菌株地域来源、食品类型与ST型之间存在明显关联，但在不同时间同一国家同种类型食品中发现相同独特ST型菌株。上海地区进口水产品中副溶血性弧菌遗传高度多样，存在中介耐药和多重耐药现象，存在高致病潜力菌株，需要引起重视。     

ε-聚赖氨酸对重要食源性致病菌的作用效果研究进展

ε-聚赖氨酸(ε-polylysine,ε-PL)是一种具有广谱抑菌性的聚阳离子多肽,对重要食源性致病菌,如单增李斯特菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌等,都具有良好的抑菌效果,因其具有良好的稳定性、安全性和生物降解性等特点已被广泛应用于食品中。文章综述了ε-PL对培养基和食品基质中的主要食源性致病菌的抑制效果,概述了ε-PL与其他抑菌剂联合使用的抑菌效果研究进展,并阐述了ε-PL的抑菌机制。以期为进一步推动ε-PL在控制食源性致病菌风险的研究和应用提供参考。     

2007—2008年西安地区鸡肉源沙门氏菌相关特性分析

目的:研究260株2007—2008年分离于西安市零售鸡肉中沙门氏菌的药敏性、血清型和基因型,以确保食品安全。方法:使用临床实验室标准化委员会(the Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)推荐的琼脂稀释法测定沙门氏菌的药敏性;世界卫生组织(WHO)推荐的玻片凝集法测定沙门氏菌的血清型;使用美国疾病预防控制中心推荐的脉冲场凝胶电泳法确定沙门氏菌的DNA酶切图谱,BioNumerics软件分析电泳结果,确定沙门氏菌的基因型。结果:沙门氏菌对萘啶酮酸、环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星、氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸、头孢哌酮、头孢曲松和头孢西丁的耐药率分别为81.4%、29.2%、22.4%、21.8%、34.6%、37.7%、32.6%、23.1%和1.9%。260株沙门氏菌共涵盖21个血清型,以肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis)、舒卜拉沙门氏菌(S.Shubra)、印第安纳沙门氏菌(S.Indiana)、鼠伤寒沙门氏菌(S.Typhimurium)、丘古沙门氏菌(S.Djugu)、德尔卑沙门氏菌(S.Derby)、维尔肖沙门氏菌...     

空肠弯曲菌快速检测试剂盒研制及AOAC验证

本文自主研制出含内标的空肠弯曲菌实时荧光PCR快速检测试剂盒,并根据美国分析化学家协会(AOAC)微生物方法对试剂盒进行验证。结果表明,该试剂盒对115株目标菌和118株非目标菌的检测特异性为100%,灵敏度达6.4 CFU/mL。将试剂盒反复冻融30次,目的基因的Ct值无显著变化。稳健性测试结果显示,除了一株空肠弯曲菌对增菌液体积较为敏感外,增菌液体积、菌体裂解时间和DNA添加量均不影响其余10株空肠弯曲菌和5株同属的其它弯曲菌的检测结果。采用生产3 d、生产4个月和1年的3个批次试剂盒进行批间重复性测试和保质期测试,结果显示3批试剂盒对16株弯曲菌的检测结果一致,且11株空肠弯曲菌的Ct值无明显差异。对人工添加鸡肉、蔬菜和牛奶样品以及鸡肉实际样品检测结果显示,试剂盒方法与传统检测方法基本一致,未出现"假阴性"。试剂盒开放性好,可在不同品牌仪器上使用,含有的内部扩增对照可防止"假阴性",可应用于食品中空肠弯曲菌的快速检测。     

2017~2019年我国进口食品食源性致病菌污染状况分析

目的 了解我国进口不同国家食品中致病菌污染状况。方法 2017~2019年采集来自七大洲不同国家进口的生肉、冰鲜水产品、乳粉、预包装食品等4大类食品共计1511份, 按照国标方法检验其中可能存在的致病菌。结果 副溶血性弧菌在鱼类中检出率相对较低(4.17%), 虾蟹贝类中检出率相对较高(26.92%); 单增李斯特菌主要存在于猪肉(13.35%)和鱼类(7.87%)中; 沙门氏菌和金黄色葡萄球菌总体污染率相对较低, 分别为2.08%和1.44%; 克罗诺杆菌和金黄色葡萄球菌在乳粉中检出率均为0.99%。来自欧洲(15.61%)和南美洲(10.71%)猪肉中单增李斯特菌检出率均高于北美洲(3.77%); 来自南美洲鱼类(主要为三文鱼)中单增李斯特菌污染率(11.39%)高于其他地区(5.77%~6.67%)。生食类水产品中检出单增李斯特菌(7.77%)、副溶血性弧菌(4.33%)、金黄色葡萄球菌(2.43%)和沙门氏菌(0.49%)。结论 不同国家和不同种类食品中致病菌种类和检出率不同, 需针对性监测; 生食水产品和乳粉中检出多种致病菌, 需要引起重视。