响应面试验优化动物源性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测的衍生条件

利用响应面法优化酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测呋喃西林代谢物前处理的衍生条件。根据Box-Behnken试验设计原理,在单因素试验基础上,以呋喃西林代谢物回收率为响应值,应用响应面分析法研究衍生剂体积、衍生剂浓度、衍生温度和衍生时间各因素间的交互作用及对呋喃西林代谢物回收率的影响。最终确定ELISA方法线性检测范围为0.13~10.51 ng/m L,IC50为1.17 ng/m L;在选取样品质量为2 g时,最佳衍生条件为衍生剂体积415μL、衍生剂浓度15 mmol/L、衍生温度57℃、衍生时间50 min,实际回收率为98.57%~103.76%;衍生产物与呋喃西林原药交叉反应率为7.63%,与其他结构类似物、功能类似物及衍生剂交叉反应率均小于0.17%;加标回收率为93.45%~103.21%,批内变异系数为1.86%~6.15%,批间变异系数为3.88%~8.84%。该衍生条件高效,检测方法准确可靠,适用于动物源性食品中呋喃西林代谢物的快速筛查。     

己烯雌酚残留检测ELISA试剂盒的研制及应用

在实验室前期制备的己烯雌酚多克隆抗体基础上建立间接竞争ELISA检测方法,研制出己烯雌酚残留ELISA快速检测试剂盒,并对其性能参数进行测定。结果表明,所选用的抗体对己烯雌酚亲和力高,除了与双烯雌酚、己烷雌酚的交叉反应率分别为6.83%和2.56%外,与其他结构类似物或功能类似物交叉反应率均小于0.01%;己烯雌酚残留检测的标准曲线为y=-28.71x+59.37,R2为0.9895,线性范围为0.08~8.17ng/mL,检测限IC10为0.05ng/mL,灵敏度IC50为1.09ng/mL,样品的加标回收率为80.04%~107.91%,平均批内和批间变异系数分别为6.41%和8.83%;与HPLC测定方法比对具有较高的相符性,相关系数R2为0.9882;该试剂盒在4℃下至少可保存6个月,可用于批量猪肉、鸡肉、鱼肉、饲料等样品中己烯雌酚残留的检测。     

环丙沙星时间分辨荧光免疫分析方法的建立与应用

建立基于时间分辨荧光免疫分析技术的环丙沙星(CPF)间接竞争检测方法。将环丙沙星-卵清白蛋白(CPF-OVA)包被于固相微孔板,CPF标准品或样品中CPF与CPF包被原(CPF-OVA)共同竞争限量的CPF抗体,用铕标羊抗兔IgG示踪,建立环丙沙星时间分辨荧光免疫分析方法(CPF-TRFIA);考察包被质量浓度、抗体稀释液、反应时间等对方法灵敏度的影响。结果表明：在优化条件下,该方法的检测限为0.5μg/L,半抑制质量浓度(IC50)为4.32μg/L,线性范围(IC20～IC80)为1.14～28.85μg/L;该方法对蜂蜜中CPF平均回收率为80.66%～100.30%,对牛奶中CPF的平均回收率为76.30%～95.22%,两者的平均批内和批间变异系数分别为7.42%和10.92%。CPF-TRFIA间接竞争法测定环丙沙星具有灵敏度高、特异性好、性能稳定的优点,适于高通量筛查。