黏玉米谷氨酰胺酶的酵母表达及其对乳蛋白的作用

为得到大量的具有生物学功能特性的黏玉米谷氨酰胺酶,首先通过分子生物学技术将前期构建的重组质粒pPIC9K-TGase经双酶切及PCR鉴定正确后,Sac I线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,用体积分数为1％的甲醇诱导其分泌表达。结果:通过SDS-PAGE电泳分析,与对照组相比,在分子质量约为60 ku处,出现1条特异的蛋白带,即目的蛋白。将酵母表达TGase与0.2%酪蛋白溶液反应2 h,SDS-PAGE电泳显示,酪蛋白被聚合生成不同分子质量的聚合物,表明黏玉米TGase对酪蛋白具有很好的交联作用。将酵母表达的TGase添加到酸奶中,通过扫描电镜观察发现,添加酵母表达的TGase酸奶网络结构变得比较致密。结论:本研究获得的酵母表达的黏玉米谷氨酰胺酶具有交联乳蛋白的生物学活性。     

牛奶对中草药有效成分吸收作用的影响

通过对小鼠灌胃给药,收集小鼠的排泄物,检测有效成分粗多糖的含量,测定牛奶对中草药有效成分粗多糖的吸收作用。结果显示：各受试物组动物体重和增重与对照组比较均无显著性差异（P〉0.05）;在中草药有效成分粗多糖的吸收测定中,麦冬＋奶与麦冬比较,吸收率差异显著（P〈0.05）;灵芝＋奶与灵芝比较、百合＋奶与百合比较、知母＋奶与知母比较,吸收率均无显著性差异（P〉0.05）,而四种中草药的混合物＋奶与4种中草药的混合物比较,吸收率差异极显著（P〈0.01）。     

牛初乳多肽的功能性研究

对牛初乳生物学功能进行了研究.结果表明,牛初乳多肽具有显著的抗体力疲劳和增强免疫力的作用.     

糖宁奶粉的动物功能试验

对完达山糖宁奶粉进行了研究.应用了去掉奶粉基质用有效成分灌胃的方法.结果表明,完迭山牌糖宁奶粉对正常小鼠空腹血糖无影响(P＞0.05).与模型对照组比,低、中、高剂量完达山糖宁奶粉能明显降低四氧嘧啶高血糖小鼠的空腹血糖(P＜0.05),且灌胃葡萄糖后完达山牌糖宁奶粉低、中、高剂量组葡萄糖曲线下面积也小于模型对照组(P＜0.05).依据<保健食品检验与评价技术规范-2003>结果判定,认为完达山牌糖宁奶粉辅助降血糖功能动物实验结果阳性.     

玉米谷氨酰胺转胺酶基因的克隆及原核表达

从玉米嫩叶中提取总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出玉米谷氨酰胺转胺酶(TGase)全长基因,回收目的片段并测序,该基因编码区全长1605bp,编码535个氨基酸残基,分子量为60.9kD,与GenBank(登录号：AJ421525)上已发表的序列同源性为100%。按正确的阅读框架将玉米TGase基因片段定向克隆到表达载体pET-28a上,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,1mmol/L IPTG诱导融合蛋白表达,经凝胶分析软件测得蛋白表达量约占总蛋白的15%,以His-Tag抗体作为一抗,采用Western-blot方法检测目的蛋白,结果证明所表达的特异蛋白是带有His-Tag的重组融合蛋白,利用Ni2+-NTA琼脂糖树脂亲和层析柱纯化目的蛋白,SDS-PAGE鉴定为单一条带,测得纯化后的TGase酶活力达到16U/mg。     

复合膜固定化酶提高米糠稳定性

利用醋酸纤维素修饰聚四氟乙烯微孔膜,再将木瓜蛋白酶固定在醋酸纤维素-聚四氟乙烯复合膜上,以新鲜米糠为原料,对其进行酶解钝化。以米糠相对脂肪酶活力为指标,在单因素试验的基础上,采用响应面法优化固定化酶膜钝化米糠脂肪酶条件。结果表明,固定化酶膜钝化米糠脂肪酶的最佳条件为环境空气相对湿度72%、钝化温度71℃、钝化时间113 min,在此条件下处理后的米糠相对脂肪酶活力下降至35.2%,有效钝化了米糠中的脂肪酶。米糠贮存2个月后,其相对脂肪酶活力仍保持在36.0%以下,且固定化酶膜重复使用6次后,其相对酶活力仍在73.0%。因此,本研究认为将固定化酶膜应用于稳定米糠,有效钝化米糠脂肪酶,并且实现固定化酶膜的可循环利用性。     

酸碱对大豆油脂中反式脂肪酸的影响

以常规加热为对照组,通过气相色谱法分析H3PO4处理或NaOH处理对非共轭亚油酸(C18∶2)的热诱导顺/反异构化的分子机制。由加热试验可知,C18∶2-9c,12t和C18∶2-9t,12c为加热大豆油脂中的主要反式异构体。随着加热温度逐渐升高、加热时间的逐渐增强,反式亚油酸含量随之增加。3种油样加热后产生反式脂肪酸的量的排序为:NaOH处理后油样>H3PO4处理后油样>未处理油样。在加热过程中,生成单反式亚油酸的量高于生成双反式亚油酸的量。在温度260℃加热8 h时,经NaOH处理的加热油脂产生的单反式亚油酸(C18∶2-9c,12t)最多,达1.222%。通过Gauss软件对油脂中的双键进行分析,可知常规加热形成C18∶2-9t,12t需要跨越能量分别为235.986,223.846 kJ/mol两个能垒,而当油脂进行H3PO4处理或NaOH处理后产生的反式亚油酸的能垒降低,表明H3PO4处理或NaOH处理均会增加加热油脂反式异构体的几率,其中NaOH处理的影响最大。     

羊乳中膻味形成机制及脱膻方法的研究进展

羊乳中含有丰富的脂肪酸及其他营养成分,是能引起人体过敏的乳制品的良好替代品.研究表明,羊乳中膻味的强弱与品种、饲料、环境和加工条件等因素有关,其中以挥发性支链脂肪酸的影响最为显著.本文主要论述了羊乳中膻味来源、形成机制,并评述了物理化学方法(热处理、紫外线照射、吸附剂、膻味掩蔽剂)、生物发酵方法和改善饲养条件对降低膻味...     

核桃油组分及其在氧化过程中的变化研究进展

旨在为核桃油氧化机制和抗氧化研究提供参考,综述了核桃油中脂肪酸、甘油三酯、主要微量伴随物、挥发性成分及其在核桃油氧化过程中的变化情况。核桃油氧化除了受到外界因素如温度、光照和包装等的影响,与其本身组分关系密切,如脂肪酸组成、甘油三酯组分和内源性微量伴随物,可通过品种选育、优化加工工艺、添加活性成分、改进包装形式等方式来延缓核桃油的氧化。     

玉米谷氨酰胺酶基因在毕赤酵母中表达条件的优化

为确定玉米谷氨酰胺转氨酶基因在毕赤酵母中的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体pPIC9K-TGZ经Sac I线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应扩增验证,甲醇诱导表达。通过正交试验确定工程菌最佳表达条件:表达培养基BMMY,诱导表达时间96 h,初始表达pH值6.0,菌体起始诱导OD600nm值4.0,诱导温度24 ℃,甲醇添加量0.6%(体积分数)、甲醇流加时间间隔12 h/次,诱导48 h后每24 h添加1 g/L甘油。采用优化的条件得到培养基上清的最高酶活达7.51 U/mL。