实时荧光PCR技术定量检测转基因豆粉的研究

本实验以美国、阿根廷、巴西豆粉、中国豆粉和转基因大豆粉标准品为材料,利用设计的特异性引物和探针,建立了实时荧光定量PCR 技术检测抗草甘膦转基因豆粉的方法,成功检测出美国、阿根廷、巴西抗草甘膦转基因豆粉和中国豆粉的转基因含量分别为5.37%、3.96%、2.26% 和0,确定了荧光PCR 技术检测抗草甘膦转基因豆粉的灵敏度为0.001%,稳定性良好。     

转基因玉米的多重PCR－毛细管电泳紫外检测技术研究

建立了转基因玉米Ly038、Mon863和Mon810的品系特异性基因多重PCR产物的毛细管电泳-紫外检测方法。根据三种转基因玉米的基因序列设计多重PCR引物,优化PCR扩增体系和条件,以8.0g/L羟乙基纤维素为筛分介质,用毛细管电泳-紫外检测法同时检测出三种玉米的品系特异性基因,11.195min内即可完成检测。用Origin软件对电泳结果进行分析并得出不同范围的DNA曲线方程,样品出峰时间的相对误差在1.03%～5.02%之间。并对纯化前后的样品进行了毛细管电泳分离的对照,发现PCR产物纯化后更适于紫外检测的毛细管电泳。多重PCR具有节约模板、节省试剂和缩短检测时间的优点,毛细管相对于传统的琼脂糖凝胶电泳,具有高效、快速、灵敏且经济环保的优点,所以此方法可广泛地应用于食品安全检测和临床检验等领域中。     

果汁DNA提取方法比较及柑橘属植物分子生物学检测技术的研究

以橙汁为研究对象,选取市售100%橙汁及橙汁饮料各3种,采用CTAB法、SDS-CTAB法以及改良CTAB法提取其DNA,对所提取的DNA的浓度、纯度及扩增效率进行比较;同时选取橙UDP-葡糖基转移酶蛋白基因设计柑橘属植物特异性扩增引物,通过定性PCR检测其特异性和灵敏度,并应用于果汁中柑橘属植物的检测。实验结果证明,由改良CTAB法获得的DNA模板质量较高,适用于果汁中DNA的提取。UGT基因引物可对柑橘属植物产生特异性扩增,最低检测限为10pg/μL。将该引用物用于市售橙汁的检测,其检测结果为阳性,从而证明UGT基因特异性引物可用于果汁中的柑橘属植物成分的检测及鉴伪研究。     

乳酸乳球菌乳脂亚种MG1363中盐诱导启动子的克隆

为了从乳酸菌中筛选和克隆启动子,实验利用缺失T7启动子的质粒载体PRSET/LacZ直接在大肠杆菌(E.coli)DH5α中分离乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)MG1363的基因启动子片段,获得了10多个具有抗氨苄和盐诱导出蓝斑的重组子。反复筛选并对其中一个抗性最高的重组子PRSET-osm进行序列测定和同源性分析发现,所克隆的基因启动子片段来自乳酸乳球菌乳脂亚种MG1363的基因组,并具有原核启动子的保守序列(Pribnow框和Sextama框)。对启动子osm进行进一步序列分析和鉴定发现,其在大肠杆菌BL21中启动LacZ基因的表达,确定osm为盐诱导启动子。     

水体中基因组提取方法的比较及水体中铜绿假单胞菌检测技术的研究

以河水为研究对象,采用沸水浴法、SDS法、CTAB法、酚氯仿法和改良法提取河水中的基因组,对提取效果进行比较,确定出最佳提取方法;并利用传统培养法和分子生物学方法对人工污染样品中的铜绿假单胞菌进行检测,对两种方法检测结果进行比较;最后实验利用4种自然界水体验证了分子生物学方法的准确性。结果表明加入溶菌酶的酚氯仿法对河水中的DNA提取效果最好;传统培养法和分子生物学方法检测结果一致,且分子生物学方法比传统培养法节省一半左右的时间;用分子生物学方法可以检测出自然界水体中的铜绿假单胞菌。