氨基化聚苯乙烯微球的制备及在克伦特罗抗体纯化中的应用

进行氨基聚苯乙烯微球制备方法及其应用于克伦特罗抗体纯化的研究。通过分散聚合法制备聚苯乙烯微球,硝基反应成硝基化聚苯乙烯微球,再还原成氨基化微球。并利用电子显微镜及红外光谱仪对微球形态及结构进行表征。成功制备氨基聚苯乙烯微球后,将微球与盐酸克伦特罗分子发生重氮化反应,得到连接克伦特罗分子的微球。将这种微球免疫亲和吸附分离盐酸克伦特罗的抗体。最后将纯化后的抗体通过紫外检测,电泳检测等方法证明所制备的微球用于抗体的纯化可行。     

氯霉素免疫检测方法的建立

采用碳二亚胺法(EDC)和混合酸酐法,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备氯霉素免疫原[CAP-HS-BSA]和包被原(CAP-HS-OVA)。经紫外和变性电泳(SDS-PAGE)鉴定,免疫原与包被原均制备成功,偶联比分别为1:16和1:17。利用免疫原免疫两只新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测氯霉素残留的方法。建立的ic-ELISA检测氯霉素方法的半数抑制浓度(IC50)为7.275ng/ml,通过对氯霉素琥珀酸钠和链霉素、青霉素及庆大霉素的交叉反应率的测定,结果显示抗体对氯霉素琥珀酸钠有较高的交叉反应率而对链霉素、青霉素和庆大霉素的交叉反应率均小于0.1%。     

庆大霉素免疫亲和柱的制备及测定

建立庆大霉素残留的间接竞争ELISA 检测方法及其用于样品处理的免疫亲和柱的制备。结果表明：ELISA方法的IC50 为3.8ng/ml,线性范围为0.1～25ng/ml(R2 ＝ 0.99),检测限为0.1ng/ml;用该抗体做的免疫亲和柱使用条件进行了探索,表明当洗脱液为70% 甲醇- 磷酸盐缓冲液(7:3,V/V),体积为5ml 时,可以达到最佳的洗脱;利用庆大霉素标准品建立了HPLC 测定的标准曲线,测得吸附率均在90% 以上,回收率均在60% 以上,可以重复使用大约5 次左右,说明该免疫亲和柱的灵敏性和可靠性。     

3 种抗糖皮质激素抗体的制备、纯化与鉴定

采用活性酯法合成地塞米松(DEX)、倍他米松(BET)、双氟米松(FLM)3 种免疫原和包被原,用免疫原分别免疫2 只新西兰大白兔,5 次免疫后进行采血获得抗血清。用盐析与DEAE- 纤维素离子交换联用的方法纯化抗血清,再用间接酶联免疫法测定抗血清的效价,其中较好的抗血清效价分别高达345600、614400、307200,具有较好的亲和性,可以满足抗原抗体反应的动力学要求。     

呋喃唑酮人工抗原的制备与鉴定

为了制备3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)的完全抗原,作者以乙醇肼和碳酸二甲酯为原料,首先合成了3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ),然后通过对醛基苯甲酸对AOZ进行衍生制得3-(4-羧基苯亚甲基)-氨基-2-恶唑烷酮(CPAOZ),以CPAOZ作为半抗原,经水溶性碳化二亚胺法(EDC),缩合酯化法(DCC)和混合酸酐法(MA)法3种方法分别与载体蛋白偶联,合成人工抗原。对于制备产物通过紫外光谱扫描分析进行了鉴定,3种抗原的偶联比率分别为8、12、17。采用3种抗原做为包被原,建立了酶联免疫(ELISA)抑制曲线。结果表明,对AOZ的半数抑制率(IC50)分别为12.9、7.6、1.1 ng/mL。采用混合酸酐法(MA法)制备的包被抗原与抗体具有较好的匹配性。3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ),是硝基呋喃类抗生素呋喃唑酮在动物体内的稳定代谢物,采用本试验制备的抗原,有望获得特异性更好的抗体。     

食品中苏丹红I酶联免疫检测方法的建立及酶学性质研究

为了检测食品中非法添加物苏丹红,采用重氮化法合成了2种苏丹红Ⅰ的衍生物,通过液相色谱-质谱(LC/MS)鉴定后,分别将两种衍生物与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)以及卵清蛋白(OVA)偶联制备完全抗原。紫外光谱表征结果证明衍生成功。将制备的BSA络合物做为免疫原免疫兔子,制备了多克隆抗体。采用方阵法确定了抗体和包被抗原的稀释比例。对影响酶免疫检测方法(ELISA)的因素包括包被液,封闭液,样品稀释液,抗体稀释液,反应时间等进行了优化。在最适反应条件下,以苏丹红质量浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标建立了抑制曲线,线性范围为0.3~23.4 ng/mL,苏丹红Ⅰ的半数抑制率(IC50)为3.0 ng/mL,检测限(LOD)为0.1 ng/mL。交叉反应测试表明,与对位红交叉反应率为140%;与苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红G的交叉反应率分别为1.1%,6.85%,6.5%;与苏丹红Ⅳ的交叉反应率<0.1%。以辣椒粉为样本,在5 ng/g和20 ng/g添加水平下得到回收率分别为90.4%和96.0%,变异系数分别为1.8%和4.9%。