凝胶层析法分离猪股骨降血压肽及其体外稳定性

将猪股骨酶解液超滤分离后,对分子质量小于5 kD的酶解滤液（IC50值为1.362 mg/mL）进行凝胶层析分离,研究洗脱液、流速、上样量3 个因素对猪股骨降血压肽分离纯化效果的影响。结果表明：以去离子水为洗脱液,流速0.6 mL/min,上样量体积分数1%时,能够得到最佳分离效果,其最高活性组分IC50值达到0.401 6 mg/mL。研究凝胶层析分离后抑制率最高的组分的稳定性,发现其有较好的耐热和耐酸碱、耐盐性,在pH 2～6中有良好的溶解性。     

制备型反相高效液相色谱分离猪股骨降血压肽的研究

猪股骨酶解液经超滤、凝胶层析、离子交换层析分离后,为了得到高活性且纯度较高的降血压肽单体,采用制备型反相高效液相色谱(RP-HPLC)对离子交换层析分离后的高活性组分进一步分离。通过对洗脱条件的优化,确定了最佳分离条件:0~5min 0%~80%A;5~8min 80%~100%A;8~15min 80%~60%A;15~20min 60%~20%A。结果显示:第一步RP-HPLC分离得到三个组分,其中峰Z2的活性最高,其IC50值为0.0437mg/m L;组分Z2进行第二步RP-HPLC分离,其峰Z21的IC50值达到0.0352mg/m L,其纯度达到96.7%。通过分析Z21的氨基酸组成以及LC-MS的分离鉴定,确定其含有6种氨基酸(Glu、Ala、Val、Leu、Phe、Pro),其分子量为764.8。     

不同排酸时间对凉山黄牛肉品质的影响

为探究不同排酸时间对凉山黄牛肉品质的影响，并为凉山黄牛排酸肉的实际生产提供一定的指导，本研究选取凉山黄牛牛背最长肌为肉样，在4 °C的排酸库中分别排酸1、2、3、4、5、6、7 d，对不同排酸时间下的细菌总数、僵直指数、挥发性盐基氮值（TVB-N值）、硫酸巴比妥酸值(TBARS值)、失水率、质构性质、肌原纤维小片化指数(MFI指数)、蛋白质热性质等指标进行测定与分析。结果表明，凉山黄牛肉排酸7 d时，其细菌总数、TVB-N和TBARS值虽有明显上升，但仍处于新鲜肉的数值范围内。排酸3~7 d的凉山黄牛肉硬度、失水率、僵直指数均降低明显(P<0.05)，MFI值显著增加(P<0.05)，此阶段牛肉蛋白降解，牛肉嫩度得到极大改善，保水性提高。排酸2、3 d凉山黄牛肉肌球蛋白的热变性温度较高，肌肉中形成大量难以解离的肌动球蛋白，在排酸4~7 d其变性温度显著下降(P<0.05)，肌肉热稳定性降低。因此，就改善凉山黄牛肉品质和提高食用品质的角度而言，将屠宰后的凉山黄牛肉排酸4~7 d具有较好的食用品质。     

离子交换层析法分离猪股骨降血压肽的研究

猪股骨酶解液经超滤、凝胶层析初步分离后,为了得到高活性且纯度较高的降血压肽,采用离子交换层析对凝胶层析分离后的高活性组分进一步分离。通过对洗脱液p H、离子强度、流速三个因素进行研究,确定了最佳分离条件:以p H=6.0、0.05mol/L磷酸盐缓冲液为A液、B液为含1mol/LNa Cl的p H=6.0、0.05mol/L磷酸盐缓冲液,洗脱流速为0.8m L/min。结果显示:离子交换层析分离得3个组分,其中组分1的活性最高,其IC50值为0.1012mg/m L;再利用凝胶层析将组分1进行脱盐,其峰2的IC50值达到0.0836mg/m L,脱盐率达到86.60%±0.5%。     

猪股骨酶解液中降血压肽的活性及其体外稳定性研究

采用0.22、0.45μm两种孔径滤膜过滤猪股骨酶解液,再利用截留分子量为5、3、2ku的超滤离心管对过滤后的酶解液进行超滤,比较两种滤膜过滤的酶解液超滤分离后的各分子量段滤液的色值、澄清度、蛋白损失率及ACE(血管紧张素转换酶)抑制活性,并将ACE抑制活性最高的分子量段进行模拟胃肠道及耐热、耐酸碱实验。研究显示:0.22μm微孔滤膜处理的酶解液超滤后的色值、澄清度效果好于0.45μm微孔滤膜,两者超滤后各个分子量段的ACE抑制率差异不显著,蛋白回收率前者较低,分子量2ku的滤液活性最高,其IC50值为0.83mg/m L。分子量2ku经胃蛋白酶、胰蛋白酶作用后,ACE抑制活性仍然保持原来的95%以上,该分子量段的滤液有良好的胃肠道耐受性、热稳定性及耐酸碱性。