重组酶聚合酶扩增技术快速检测猪肉及其制品中ASFV、PDCoV和SVA

目的 建立非洲猪瘟病毒（ASFV）、猪Delta冠状病毒（PDCoV）和A型塞内卡病毒（SVA）多重重组酶聚合酶扩增（RPA）快速检测方法。方法 以重组质粒为模板进行RPA检测,并优化温度、时间、引物探针配比等反应条件,建立多重RPA检测方法,应用于实际样本的检测;与实时荧光聚合酶链式反应（qPCR）结果对比,评价所建立方法的准确率。结果 本方法可在20 min内实现对3种病毒的同时检测,特异性良好;对ASFV、PDCoV、SVA灵敏度分别为940、770、570 copies/μL;用于实际核酸样本检测,准确率分别为93.33%、100.00%、100.00%。结论 本文建立的多重RPA方法快速、便捷,适合猪肉及其制品中ASFV、PDCoV、SVA的现场初筛。     

猪肉及制品中HEV、PEDV和PDCoV三重qPCR方法的建立与应用

人兽共患病引发的动物源性食品安全事件频发，为从食品原料源头上控制和保障其食用安全，控制猪肉及其制品消费成本，本研究构建了可同时检测猪肉及制品中戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)和猪δ冠状病毒(Porcine delta corona virus,PDCoV)三重实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qPCR)方法。结果表明，三重qPCR方法只能扩增出3种目的病毒的特异性基因片段，特异性好；对HEV、PEDV和PDCoV三种病毒的最低检测限分别为6.02、6.98、6.92 copies/μL；组内和组间变异系数(CV%)在0.10%～3.00%之间，重复性好。将所建立方法应用于248份出口猪肉及制品和282份生猪粪拭子的检测，同时以相应病毒标准检测方法进行平行检测，结果显示猪肉及制品中三种病毒的检出率均为0%，与标准方法检测结果一致。生猪粪拭子中，该方法对PEDV、PDCoV和HEV三种病毒的检出率分别为1.06%、3.19%、0.3...