金枪鱼红肉酶解液对小鼠抗疲劳和调节肠道菌群效果的研究

以金枪鱼红肉酶解液为研究对象,研究其在抗疲劳、抗氧化和肠道菌群调节方面的作用。本研究首先制备金枪鱼红肉酶解液,通过MALDI-TOF/TOF对多肽组成和丰度进行鉴定;随后对小鼠进行连续8周灌胃,评价其抗疲劳、抗氧化及对肠道菌群调节的能力。结果表明,金枪鱼红肉酶解液中富含与抗疲劳作用密切相关的精氨酸和亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸三种支链氨基酸。与对照组相比,酶解液分别延长了雌雄小鼠72.8%和70.8%的转棒时间。同时,雄性处理组血清中抗疲劳参数指标磷酸肌酸激(CK)酶活和乳酸(LD)含量分别降低12.1%和18.7%,乳酸脱氢酶(LDH)酶活增加29.8%;抗氧化参数指标GSH-Px和SOD分别增加38.4%和13.9%,MDA含量降低48.6%;而在雌性处理组中,CK酶活和LD含量分别降低3.7%和12.4%,LDH酶活增加13%,GSH-Px和SOD分别增加4.99%和1.74%,MDA含量降低39.6%,肝脏中各项指标的变化趋势与血清中一致。此外,酶解液降低了雌性小鼠肠道菌群物种丰富度和多样性,而只降低了雄性小鼠的菌群丰富度;拟杆菌门和厚壁菌门丰度在雌雄小鼠中呈现相反的变化趋势;乳酸菌、乳杆菌和短链脂肪酸产生菌等益生菌丰度上升;雌雄小鼠间仅存在3个共有关键OTUs。     

响应面法优化脂肪酶富集金枪鱼油中二十二碳六烯酸甘油酯工艺研究

以金枪鱼副产物为原料提取精炼鱼油,研究了皱褶假丝酵母脂肪酶（Candida Rugosa）富集金枪鱼油二十二碳六烯酸（ Docosahexaenoic Acid, DHA）甘油酯的工艺条件。在单因素实验的基础上选取水油质量比、脂肪酶添加量、反应温度和时间4个因素为自变量,以甘油酯中DHA、ω-3含量和甘油酯得率为响应值,采用中心组合（box–behnken）进行响应面实验设计和分析。结果表明,最佳条件为水油比1:1.7,脂肪酶添加量1%,反应温度50 ℃,反应时间3 h。在此条件下,甘油酯中DHA质量分数为35.55%,ω-3质量分数为42.25%,甘油酯得率为73.85%。本课题成功建立了甘油酯中DHA 、ω-3含量 (R2 = 0.8832) 和甘油酯得率(R2 = 0.9425) 的拟合模型。卡方检验分析表明这两种模型的预测值和实测值无显著性差异(P > 0.05)。     

基于电子鼻和HS-SPME-GC-MS技术解析乌牛早茶的挥发性风味物质

为探究乌牛早的嫩叶和老叶在不同温度下挥发性物质成分,本文利用电子鼻测试不同温度下乌牛早茶叶的气味差异,并结合固相微萃取和气质联用(HS-SPME-GC-MS)技术对挥发性风味物质进行分析。结果表明:电子鼻能灵敏地检测到不同温度处理条件下嫩叶和老叶的气味变化,主成分分析(PCA)显示各个样品间差异明显。通过GC-MS分析在常温和处理温度40、60、80、100℃的乌牛早嫩叶中分别检测出15、20、14、17、17种挥发性物质,其主体风味成分主要有花果香味的芳樟醇、橙花醇等醇类物质。同时,在相同温度处理条件下的老叶中分别检测出21、21、19、18、27种挥发性物质,其主体风味成分主要有清新叶草香味的水杨酸甲酯等酯类物质。     

黑线鳕鱼皮胶原蛋白胰蛋白酶酶解多肽对UVB诱导HaCaT光损伤的抑制作用

目的：研究黑线鳕鱼（Melanogrammus aeglefinus）皮胶原蛋白胰蛋白酶酶解多肽的抗氧化、抑制光损伤作用,提高鱼皮的再利用价值。方法：利用单因素试验和响应面试验设计,探讨黑线鳕鱼皮胶原蛋白的最佳酶解工艺。将制得的酶解多肽通过基质辅助激光解离飞行时间串联质谱仪（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight tandem mass spectrometry,MALDI-TOF MS/MS）测定多肽序列。利用Discovery Studio中CDOCKER模块将所得的优势肽与抗氧化相关的Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）进行分子对接。用不同质量浓度的多肽预处理人表皮角质形成细胞（HaCaT）后,使用中波紫外线诱导HaCaT细胞构建光损伤模型,通过超氧化歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活性、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量及细胞凋亡与周期来研究酶解多肽抑制光损伤的能力。结果：黑线鳕鱼皮胶原蛋白在胰蛋白酶质量分数1.23%、酶解温度52.95?℃、酶解时间1.75?h条件下,水解度为78.33%。MALDI-TOF MS/MS测定出酶解液中的优势肽序列为V-IFFVTMGTP-R、L-SIVPV-R和L-MHT-T。通过分子对接发现V-IFFVTMGTP-R与Keap1结合最稳定,从而预测其具有抗氧化的作用。用250?mg/mL酶解液处理光损伤的HaCaT细胞,其SOD、GSH-Px活性较模型组极显著提高（P＜0.01）,MDA含量极显著降低（P＜0.01）。结论：黑线鳕鱼皮胶原蛋白胰蛋白酶酶解多肽具有抗氧化活性,对光损伤具有一定的抑制作用。     

基于高通量测序技术对浙江传统发酵蔬菜微生物多样性的解析

以浙江地区传统发酵蔬菜臭冬瓜、臭苋菜梗、酸笋和酸茭白为研究对象,采用Illunina MiSeq高通量测序技术,分别分析浙江传统发酵蔬菜的汁液、固形物和培养物中细菌和真菌微生物群落组成和多样性,探讨“臭”和“酸”类发酵食品的微生物群落组成差异。结果表明：14 个样品中细菌和真菌的测序覆盖率分别为0.97和0.99。分析细菌,臭苋菜梗固形物的可操作分类单元（operational taxonomic unit,OTU）最多、Shannon指数最高;而酸笋固形物中的OTU最少,酸笋汁的Shannon指数最低;且臭苋菜梗汁、固形物和培养物以及酸笋固形物和培养物的菌群结构更为接近。分析真菌,臭冬瓜培养物和酸茭白固形物中的真菌OTU最多,臭苋菜梗培养物中的OTU最少,而酸茭白汁中没有检测出真菌;酸笋汁的Shannon指数最高,臭苋菜梗培养物的Shannon指数最低;除卤水、臭苋菜梗汁和酸笋样品外其余样品的真菌群落组成更为接近。在属水平,臭冬瓜培养物、酸笋汁、酸笋固形物和酸茭白汁的优势细菌属分别为脱硫弧菌属（Desulfovibrio）、克雷伯氏菌属（Klebsiella）、埃希菌属（Escherichia）和Caproiciproducens,卤水培养物、酸茭白固形物和培养物的优势细菌属为梭菌属（Clostridium）,臭苋菜梗汁、固形物和培养物的优势细菌属为拟杆菌属（Bacteroides）,卤水、臭冬瓜汁和固形物的优势细菌属为乳酸杆菌属（Lactobacillus）;卤水的优势真菌属为柯达酵母属（Kodamaea）,臭苋菜梗汁、固形物和培养物的优势真菌属为假丝酵母属（Candida）,而其他样品的优势真菌属为Leptospora。     

金枪鱼鱼骨活性钙对鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)活力和凋亡作用

目的:以金枪鱼骨为原料,制备柠檬酸-苹果酸钙剂(CMC),研究其对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)的细胞活力、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:在小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)培养液中,分别加入高浓度(1 μg/mL)CMC和低浓度(0.1 μg/mL)CMC,利用MTT法检测对MC3T3-E1细胞活力的影响,流式细胞仪检测血清饥饿诱导的细胞凋亡。结果:高浓度和低浓度的钙对MC3T3-E1细胞活力均有显著的促进作用,24 h的高钙组的细胞增长率(9.67%)优于低钙组(8.95%);36 h和48 h后低钙组的增长率分别为14.96%和20.33%,明显优于36 h和48 h作用后的高钙组(6.23%和1.73%),两组细胞凋亡率与空白组比较差异较小,且均显著低于对照组(p<0.01)。结论:CMC高钙组和CMC低钙组在一定浓度范围内,能促进MC3T3-E1细胞活力显著增强,并且改善血清饥饿诱导的成骨前体细胞凋亡。     

基于电子鼻、电子舌和GC-MS分析饲料中添加金枪鱼蒸煮液对巴马香猪猪肉气味和滋味的影响

本文研究了巴马香猪饲料中添加金枪鱼蒸煮液对猪肉气味和滋味的影响。采用电子鼻与GC-MS研究猪肉气味的变化、电子舌与HPLC检测猪肉滋味的变化。结果表明:电子鼻前2个主成分(PC1和PC2)累计方差贡献率为99.41%,能够涵盖传感器原始信息,反应猪肉气味的变化;与对照组相比,实验组中醛类、酯类和醇类化合物含量分别增加13.294%、5.930%和0.244%,而烷烃类和酮类化合物含量分别减少6.864%和2.639%,赋予了猪肉显著的油脂气味、果香和清香青草气味,同时减少了腥味;作为主要的呈味氨基酸,鲜味氨基酸和甜味氨基酸含量分别增加3.48%和3.29%,而苦味氨基酸含量降低4.27%。本研究证明,喂食金枪鱼蒸煮液可以有效提高巴马香猪猪肉的气味和滋味,这为巴马香猪工业化养殖饲料优化和金枪鱼加工废弃物再利用提供了重要参考。     

养殖大黄鱼挥发性成分分析

探讨不同温度下养殖大黄鱼背、腹部挥发性成分的差异。运用电子鼻和顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱联用技术(HS-SPME-GC-MS)对其挥发性成分进行定性定量分析。结果表明,新鲜的养殖大黄鱼肌肉中含有的己醛、庚醛和辛醛等醛类物质对整体风味影响较大,使其具有令人不愉快的腥味;加热后,挥发性成分发生显著变化。经过50 ℃加热的鱼肉中的挥发性成分主要有3,5-辛二烯-2-酮、辛醛、壬醛、2,6-壬二烯醛等,使腥味减少并赋予其轻微的鱼香味;经过110 ℃加热后,烃类物质如甲苯、十一烷和十五烷增加,使鱼肉甜香,鱼腥味在很大程度上减弱;经过170 ℃加热的鱼肉中的主要挥发性物质为呋喃类化合物,对其烘烤风味的形成具有重要作用。研究结果对养殖大黄鱼的精深加工具有一定的指导意义。     

金枪鱼碎肉酶解液对巴马香猪肉风味和滋味的作用

以金枪鱼碎肉酶解液作为添加剂喂养巴马香猪,研究其对猪肉风味和滋味的影响。运用电子鼻与气相色谱-质谱(GC-MS)测定巴马香猪肉风味,运用电子舌和高效液相色谱(HPLC)测定其滋味。结果显示:GC-MS测得实验组的醛类总的相对百分含量为65.63%,比对照组高出20.44%,使猪肉具有明显的清香、果香和油脂香气味;电子舌与HPLC测定出实验组鲜味氨基酸和甜味氨基酸的质量分数为38.39%和27.04%,比对照组高5.76 %和1.8%,味道阀值比对照组高2.09和0.45,实验组苦味氨基酸比对照组少3.05%,味道阀值相差较小。本研究表明金枪鱼碎肉酶解液喂养巴马香猪对肉质的风味和滋味有很好的改善作用,能明显的增加肉的鲜味和甜味。     

仿刺参胶原蛋白多肽对Ⅱ型糖尿病小鼠肾脏的保护机制

目的:研究仿刺参胶原蛋白多肽对db/db糖尿病小鼠的保护机制。方法:通过仿刺参多肽分组喂养糖尿病小鼠,测定小鼠血清中TC、TG、LDL-C和HDL-C含量及胰岛素浓度。采用双向电泳研究小鼠的肾脏蛋白,通过差异蛋白筛选,GO功能注释,代谢通路等分析确定仿刺参多肽对糖尿病小鼠肾脏的保护机制。生化指标显示:仿刺参多肽可以降低血清中TC、TG、LDL-C的含量和胰岛素浓度,提高HDL-C水平。双向结果表明:相对于模型组,试验组共检测出上调蛋白81个,下调蛋白51个。GO结果显示:差异蛋白的功能主要集中在蛋白转运和信号传导过程。KEGG分析发现,差异蛋白主要富集在代谢途径、胰岛素抵抗和胰岛素信号传导过程。结论:喂养仿刺参多肽的小鼠体内视黄醇结合蛋白4的表达下调,血糖水平下降,胰岛素信号通路恢复正常,可以有效缓解糖尿病的症状。