谷氨酸棒杆菌ATCC 14067中L-精氨酸合成途径关键酶的过表达对L-精氨酸合成的影响

谷氨酸棒杆菌中与精氨酸合成相关的酶主要是由2个操纵子基因簇argCJBDFR和argGH编码合成。此外,在L-精氨酸合成途径的前体物谷氨酸和氨甲酰磷酸的合成中,由gdh、icd、gltA、carAB 4个基因分别编码的谷氨酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、柠檬酸合酶、氨甲酰磷酸合成酶是谷氨酸和氨甲酰磷酸合成的关键酶。研究以解除了L-精氨酸的别构抑制作用的谷氨酸棒杆菌为出发菌株,利用3种不同抗性的表达质粒分别对这些关键酶的编码基因进行串联共表达。在最终得到的13个菌株中,L-精氨酸产量最高的菌株是出发菌株L-精氨酸产量的6.23倍,这表明串联过表达菌株L-精氨酸合成途径中,不同节点关键酶的编码基因可以更有效地提高菌株中L-精氨酸的产量,为进一步改造L-精氨酸的合成途径、优化L-精氨酸的产量奠定了基础。     

比色法测定巴西虫草菌丝体中虫草酸的含量

利用比色法简便、准确和快速地测定了巴西虫草菌丝体中虫草酸的含量.结果表明,虫草酸即D-甘露醇的最大特征吸收峰在412 nm处,质量浓度在10～50 mg/L范围内线性良好,它的线性回归方程为:Y=0.0102X-0.00029,R2=0.9989;仪器精密度良好,RSD为0.35%(n=6);样品显色后在180 min内基本没变化;平均回收率为100.30%,RSD为1.44%(n=5);干扰试验表明在葡萄糖、鼠李糖和果糖中,只有果糖对检测结果有较大影响.通过果糖的特征吸收峰和高效液相色谱法表明,巴西虫草菌丝体中没有果糖的存在,验证了比色法测定巴西虫草菌丝体中虫草酸含量的准确性;用该方法测定的巴西虫草菌丝体中虫草酸的质量分数为8.45%,RSD为0.34%(n=6).     

毛云芝菌漆酶的分离纯化和性质研究

将发酵液经真空抽滤后得粗酶液,以硫酸铵为盐析剂进行分级盐析沉淀、再经DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析对漆酶进行分离纯化,用SDS-PAGE证明可获得纯的漆酶,纯化倍数为183.69倍,酶活回收率为24.77%。实验表明,该酶在30℃条件下具有较高的稳定性;在pH3.4～5.8范围内的相对酶活均在80%以上,漆酶稳定性较好,pH3.8的时候漆酶的稳定性最好。     

白腐菌Coriolus hirsutus产漆酶培养条件的优化研究

研究Coriolus hirsutus在缓冲体系以及非缓冲体系下不同的初始pH、不同的金属离子、诱导剂、表面活性剂、种龄、接种量以及装液量等培养条件对该菌产漆酶的影响,并对该菌在最优培养条件下的代谢曲线进行分析.结果表明:缓冲体系、初始pH以及低浓度的金属离子对产酶的影响较大;加入1mL 0.05mmol/L的单宁酸能显著提高该菌的产酶能力.最适产酶条件为:缓冲体系下初始pH值4,种龄4 d,50 mL种子培养基中的接种量4 mL,装液量为250mL三角瓶中装入70mL培养基.该菌在最优培养条件下的酶活力水平为7060 U/mL,是优化前的2.2倍.     

刍腐菌Coriolus hirsutus产漆酶培养条件的优化研究

研究Coriolus hirsutus在缓冲体系以及非缓冲体系下不同的初始pH、不同的金属离子、诱导剂、表面活性剂、种龄、接种量以及装液量等培养条件对该菌产漆酶的影响,并对该菌在最优培养条件下的代谢曲线进行分析。结果表明：缓冲体系、初始pH以及低浓度的金属离子对产酶的影响较大;加入1mL0．05mmol／L的单宁酸能显著提高该菌的产酶能力。最适产酶条件为：缓冲体系下初始pH值4,种龄4d,50mL种子培养基中的接种量4mL,装液量为250mL三角瓶中装入70mL培养基。该菌在最优培养条件下的酶活力水平为7060U／mL,是优化前的2．2倍。     

还原型谷胱甘肽的特性、工业生产及在大健康行业的应用研究进展

文章概述了还原型谷胱甘肽(glutathione, GSH)的结构特征和生理活性,及其在生物体内的代谢途径,总结了GSH的制备、提取纯化、应用及工业生产等方面的研究进展,并展望了其功能活性、工业生产和产品应用等方面今后的研究方向。     

响应面法优化嗜热厌氧代谢工程菌发酵产乙醇的培养基

利用响应面法优化嗜热厌氧代谢工程菌产乙醇的培养基,在单因素实验基础上,采用Plackett-Burman 设计对影响嗜热厌氧代谢工程菌发酵产乙醇的重要培养基组分进行了筛选,确定主要影响因子为葡萄糖、木糖和酵母提取物.再用最陡爬坡实验逼近最大响应区域.最后用中心组合设计和响应面分析法,确定了主要影响因子的浓度.优化后的培养基组成为葡萄糖13.07g/L,木糖9.58g/L,酵母提取物3.78g/L,其他组分浓度同MTC培养基,不添加一水半胱氨酸盐酸盐和二盐酸吡哆氨.在此培养基条件下,乙醇产量和乙醇得率分别为(6.102±0.21)g/L和(0.38±0.012)g/g,是优化前产量的1.46倍.     

表达磷酸转移酶工程菌整细胞催化肌苷5＇-位磷酸化的工艺条件研究

本文利用构建的表达产气肠杆菌酸性磷酸转移酶phoc基因的EcoliBL21,对其整细胞催化肌苷5＇-位磷酸化的工艺条件进行了研究。研究结果表明在整细胞PHOC酶活、肌苷和焦磷酸浓度分别为45U、100mM和120mM时,反应6h肌苷转化率i老到63．36％。为进一步提高转化率,研究了3种表面活性剂对整细胞肌苷转化率的影响,在Trion-x-100浓度为0．3％时,肌苷转化率提高到74．59％。该研究为酶催化肌苷5＇-位磷酸化的工业化进程提供了技术支持。     

毛云芝菌产漆酶液体培养条件的优化

探索了不同的培养条件下毛云芝菌产漆酶的情况,发现该菌漆酶属于组成型漆酶,其酶活力高,产酶周期短,酶的合成与菌体生长没有明显相关性;以漆酶的酶活为指标,采用正交试验设计方法对毛云芝菌液体培养的摇瓶生长条件进行了优化研究.结果表明:优化培养基的组成(质量分数)为麸皮3%,蛋白胨0.2%,牛肉膏0.3%,MgSO4·7H2O 0.05%, KH2PO4 0.3%; TE 6%(体积分数),VB1 20 mg/L;自来水,pH自然.该营养条件下的酶活为1 668 U/mL,约是优化前培养基酶活的16倍,为工业化生产提供了一定的理论依据.     

表达磷酸转移酶工程菌整细胞催化肌苷5′-位磷酸化的工艺条件研究

本文利用构建的表达产气肠杆菌酸性磷酸转移酶phoc基因的E.coli BL21,对其整细胞催化肌苷5′-位磷酸化的工艺条件进行了研究。研究结果表明在整细胞PHOC酶活、肌苷和焦磷酸浓度分别为45 U、100 mM和120 mM时,反应6 h肌苷转化率达到63.36%。为进一步提高转化率,研究了3种表面活性剂对整细胞肌苷转化率的影响,在Trion-x-100浓度为0.3%时,肌苷转化率提高到74.59%。该研究为酶催化肌苷5′-位磷酸化的工业化进程提供了技术支持。