抗孔雀石绿单链抗体-碱性磷酸酶融合表达和活性鉴定

采用重叠延伸的方法成功将抗孔雀石绿（malachite green,MG）单克隆细胞的轻链VL和重链VH用连接肽(Gly4Ser)3连接,形成单链抗体（single chain variable fragment,scFv）基因,并将其酶切连接进入含有碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,PhoA）基因的载体plip6/GN中,成功构建重组质粒plip6/GN-MG-scFv。随后重组质粒转入大肠杆菌BL21,经诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting鉴定结果表明所获得的融合蛋白scFv-PhoA大小约72 kD。利用scFv与MG特异性结合的活性和PhoA催化对硝基苯磷酸二钠的显色机制,经过直接竞争酶联免疫吸附法测定融合蛋白scFv-PhoA的IC50为9.81 ng/mL。本方法操作简单、灵敏度高且检测时间短,这为进一步进行MG免疫法快速检测提供了参考。     

小分子物质酶联免疫分析方法的研究进展

自免疫分析技术问世以来,出现了多种快速检测产品如ELISA试剂盒、免疫层析试纸条,但是目前的快速检测试剂盒普遍存在检测灵敏度低、线性范围窄、易出现假阳性等问题。为解决这些问题,科研工作者发现小分子物质在检测中显示出许多特点,而这些特点正是研究开发酶联免疫检测技术的关键,小分子物质的快速检测已占据越来越重要地位。本文归纳国内外小分子物质酶联免疫分析技术研究成果,总结小分子物质酶联免疫分析方法的内容及特点,介绍小分子物质酶联免疫分析方法中抗原制备特点,分析小分子物质检测中抗体种类及特性,重点比较酶联免疫分析方法中直接和间接竞争法,并分析非竞争法在小分子物质检测中优势,旨在为今后免疫学快速检测技术的研究与开发提供帮助。