鲫鱼卵唾液酸糖蛋白对SAMP6小鼠骨丢失的保护作用

本文研究了鲫鱼卵唾液酸糖蛋白(Sialoglycoproteins of Carassius auratus eggs,Ca-SGP)对SAMP6小鼠骨丢失的保护作用。以雄性SAMP6小鼠为老年性骨质疏松症动物模型,连续灌胃Ca-SGP 150d后,检测血清骨代谢生化标志物,测定小鼠股骨矿化沉积率、胫骨骨密度及松质骨微结构。结果显示,经Ca-SGP(500mg/kg·bw)干预后,小鼠血清中骨生成标志物骨源性碱性磷酸酶的活性和I型前胶原羧基端前肽、骨钙素的含量得到显著升高(p0.01),骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶和组织蛋白酶K的活性得到显著抑制(p0.01);胫骨骨密度提高10.92%(p0.01);松质骨骨体积分数、骨小梁数目及厚度均得到显著增加(p0.01),骨小梁间隙显著缩小(p0.01);骨矿化沉积率提高98.87%,差异显著(p0.01)。该研究表明Ca-SGP可改善老年性骨质疏松症小鼠低骨转换,提高骨密度,改善骨小梁结构,促进骨矿化,为开发抗骨质疏松症药物和功能食品提供了理论支持。     

鲫鱼卵唾液酸糖蛋白化学结构分析及对前成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响

目的：成熟的鲫鱼卵经提取、分离纯化得到唾液酸糖蛋白（sialyglycoproteins of Carassius auratus eggs,CA-SGP）,分析其化学结构,及对前成骨细胞MC3T3-E1增殖分化的影响。方法：采用水提法从成熟鲫鱼卵中提取水溶性蛋白,经阴离子交换色谱、凝胶过滤色谱分离纯化鲫鱼卵水溶性蛋白得到CA-SGP,测定其基本组成,采用高效凝胶液相色谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子质量和纯度,PMP柱前衍生高效液相色谱法测定其单糖组成;采用噻唑蓝法测定MC3T3-E1细胞的增殖率,酶联免疫法测定Ⅰ型胶原蛋白（collagen type Ⅰ,COLⅠ）和骨钙素（osteocalcin,OCN）的分泌量及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的活性,茜素红染色法测定矿化结节的数量。结果：得到单一的组分CA-SGP,在高效凝胶过滤色谱色谱图上呈现单一的糖和蛋白的检测重叠峰,在凝胶电泳图上呈现单一弥散性条带,其蛋白质含量为14.33%,己糖含量为62.81%,N-乙酰神经氨酸（N-acetylneurainic acid,Neu5Ac）含量为19.72%。单糖组成测定结果显示：CA-SGP主要由甘露糖、葡萄糖胺、半乳糖胺组成,其物质的量比为7.61∶6.70∶1.00;MC3T3-E1细胞与CA-SGP共同孵育后,其增殖率显著增加,COLⅠ和OCN的分泌量分别增加了39.28%和83.06%,ALP活性提高了285.08%,矿化结节的数量增加了96.41%,说明CA-SGP显著促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化。结论：CA-SGP为富含Neu5Ac的糖蛋白,具有显著促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的作用,对开发抗骨质疏松功能性食品具有重要意义。     

东革阿里多糖对红细胞氧化溶血的保护作用

采用超声结合水提的方法提取东革阿里的多糖,通过L9(34)正交试验确定最佳提取条件。利用柱层析纯化得到一种含糖醛酸的新型多糖组分Ali-1;通过分子量检测和单糖组成分析对Ali-1进行基本结构表征;采用氧自由基吸收能力(ORAC)和人血红细胞溶血模型测定多糖的抗氧化活性,并同时测定红细胞内活性氧物质(ROS)、丙二醛(MDA)水平和过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)抗氧化酶活力的变化。结果表明:东革阿里多糖最佳提取条件为料液比1:40、浸提温度95℃、超声波破碎功率300 W、浸提时间2 h,最适条件下东革阿里的粗多糖得率为10.09%;Ali-1的平均分子量为14.3 ku,主要由木糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸组成,其摩尔比为:4.43:1.10:1:1.14;Ali-1的QRAC值为302.48±2.71μmol Trolox/g,且Ali-1的预处理使得AAPH损伤的人血红细胞内的ROS和MDA水平降低,使红细胞恢复到正常状态;虽SOD、GSH-Px和CAT平均酶活力降低,但结果表明较弱的红细胞也受到了保护。综上所述,经分离纯化后的东革阿里多糖组分Ali-1可以保护人血红细胞免受AAPH的损伤,具有较好的抗氧化活性。