多重实时荧光定量PCR快速检测婴幼儿奶粉中沙门氏菌、克罗诺杆菌和金黄色葡萄球菌

目的建立多重实时荧光定量PCR(multiplex quantitative real-time PCR,multiplex qPCR)快速检测奶粉中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和克罗诺杆菌3种常见致病菌的方法。方法筛选目标菌株的特异性引物与探针,优化反应体系,建立稳定的多重q PCR反应体系。通过阳性菌株加标的方式验证体系的特异性,并确定人工污染奶粉的检出限。结果各对引物探针对目标菌株均能扩增,多重实时荧光PCR未发现交叉反应,对17株非目标菌进行检测均未检出,人工污染奶粉中克罗诺杆菌和沙门氏菌的检出限均为10~3 CFU/mL,金黄色葡萄球菌的检出限为10~4 CFU/mL。结论本研究方法可实现婴幼儿奶粉样品中3种致病菌qPCR高效率检测。     

冠突散囊菌DNA提取方法的比较

为寻找一种良好的提取冠突散囊菌基因组DNA的方法。实验以冠突散囊菌(CGMCC 3.0462)标准菌株为研究材料,比较不同方法提取冠突散囊菌的基因组DNA的效果差异,再利用DNA浓度测试、琼脂糖凝胶电泳及PCR扩增3种手段比较DNA提取的效果。结果显示:600W超声破壁和液氮研磨破壁提取的冠突散囊菌基因组DNA杂质含量高。而200W的超声功率无法破碎冠突散囊菌细胞壁,无法提取DNA。400W超声破壁提取的DNA的浓度较大、纯度高、效果好,适用于冠突散囊菌基因组DNA的提取。但400W超声破壁、600W超声破壁和液氮研磨破壁3种方法提取的基因组DNA均达到PCR实验的要求。     

牛肉制品中大豆掺假的荧光PCR鉴别体系的优化

根据常作为"假牛肉"原料或掺入牛肉加工食品中的植物原料——大豆蛋白,设计特异性引物和探针。在确定其高特异性后,对荧光PCR中5个因素即Mg2+终浓度、dNTPs终浓度、Taq酶用量、引物和探针终浓度以及模板DNA用量进行优化。同时测试该方法的灵敏度和优化后的特异性。结果表明该荧光PCR反应可对牛肉及其制品中可能掺假的大豆蛋白进行准确、稳定、快速的鉴定。