混合型反相微乳体系萃取茶渣蛋白的工艺优化

使用双（2-乙基己基）磺基琥珀酸钠（AOT）、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基硫酸钠（SDS）分别和吐温80（Tween80）混合制备了三种反相微乳体系,并通过单因素实验研究了表面活性剂浓度、离子型表面活性剂含量、水分含量（W₀）、水相pH、萃取温度和萃取时间等因素对蛋白质前萃率和KCl浓度、水相pH和萃取温度对蛋白质后萃率的影响,然后通过正交试验得到了最佳萃取条件。结果表明,Tween80-CTAB微乳体系对茶渣蛋白的提取效果较好,在表面活性剂浓度0.10 mol/L,离子型表面活性剂含量70%,水相pH13.0,W₀ 25,萃取温度40 ℃,萃取时间为40 min的最佳条件下,茶渣蛋白的前萃率达到最大值16.17%,其后萃率在KCl浓度为1.2 mol/L,pH7.0,提取温度40 ℃的最佳条件下可达到94.78%。SDS-PAGE电泳图的结果表明,反相微乳萃取得到的茶渣蛋白分子条带较小,即能够选择性的萃取小分子蛋白。     

超声波预处理酶解制备茶渣蛋白ACE抑制肽及其活性分析

血管紧张素转换酶（Angiotensin-I Converting Enzyme,ACE）在血压调节中扮演重要角色,抑制其活性有利于维持血压平衡。食源性ACE抑制肽具有安全、易吸收的特点,受到广泛关注。本研究旨在从茶渣蛋白中获得一种具有高ACE抑制活性的新肽。以ACE抑制率为指标,通过对三种超声方式的比较,确定最佳超声方式;以单因素实验为基础,进行响应面优化确定最佳超声波预处理参数;酶解液分离纯化运用超滤的方法,并对截留分子量小于3 kDa组分进行稳定性分析。结果表明,超声波预处理为最佳处理方式,得最优条件为超声功率300 W、超声温度45 ℃、超声时间25 min。在最佳超声波预处理条件下,ACE抑制率为64.8%,相比于未超声组54.1%提高了10.7%;当截留分子量小于3 kDa时,ACE抑制肽的抑制率为82.3%,相比于原始酶解液提高了17.5%。当温度30 ℃升温至90 ℃,ACE抑制肽的抑制率从82.3%降低至78.3%,减少了4.3%;酸碱度、盐溶液变化其对ACE抑制率表现稳定;模拟消化环境中8 h后,ACE抑制率从82.3%降为62.3%。