食品中椰毒假单胞菌酵米亚种实时荧光PCR检测的研究

目的建立食品中椰毒假单胞菌酵米面亚种实时荧光PCR检测方法。方法根据椰毒假单胞菌酵米面亚种16S～23S rRNA基因片段序列,用Oligo7设计一对特异性引物和一个TaqMan探针,摸索最佳退火温度,最佳引物和探针浓度,建立椰毒假单胞菌酵米面亚种实时荧光PCR检测方法。通过对唐菖蒲伯克霍尔德氏菌以及22种其他标准菌株进行实时荧光PCR检测,验证本法的特异性和抗干扰性。同时从菌液浓度和DNA浓度水平上进行研究,确定该检测方法的灵敏度。结果用该方法检测23种菌,除唐菖蒲伯克霍尔德氏菌外,其他22种细菌均为阴性。抗干扰性试验显示杂菌对检测结果不影响,本法抗干扰能力强。通过灵敏度试验的研究,确定本法检测椰毒假单胞菌酵米面亚种的菌液灵敏度为1×10~2 CFU/mL,DNA灵敏度为250 fg/μL。结论本试验设计的引物和探针具有较强特异性、抗干扰性以及灵敏度,该方法具有很好的研究价值和应用前景。     

食源性致病菌快速检测仪器现场评价分析

目的加快快速检测技术和装备的推广,规范其在食品安全监管中的应用,组织食品安全快速检测技术现场验证评价活动。方法以准确率、假阴性率、假阳性率、时效性被作为检测结果的考量指标,考察14家企业的仪器检测食源性致病菌情况,主要考核的项目为沙门氏菌和金黄色葡萄球菌,每家企业考核样为4个,每个考核样均需检验沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。结果各参试企业的表现差距较大,大部分快检仪器灵敏度在103~104 CFU/m L之间。14家企业中,4家企业准确率为100%,有71.42%的企业出现了假阴性。结论恒温实时荧光PCR技术在食源性致病菌快检中发挥比较明显的优势。准确率、假阴性率、假阳性率、时效性这4个参数能科学有效地评价食源性致病菌快检仪器。