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以甲型副伤寒沙门菌为检测目标,通过比较基因组和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)验证方法筛选到4 个该血清型的特异性基因,其中以gene_3105作为该血清型的检测靶点设计引物PA23;并结合沙门菌属特异性引物139-141,建立一种甲型副伤寒沙门菌的PCR检测方法。优化PCR反应体系,并对该检测体系的特异性、灵敏度、抗干扰能力及人工污染样品检出限等方面进行评价。结果表明,当样品中含有甲型副伤寒沙门菌时,该体系能扩增出2?条特异性条带,含有其他血清型的沙门菌仅能扩增出284?bp条带,不含沙门菌无扩增条带产生。灵敏度评价表明,基因组DNA和纯菌菌落检出限分别为32.4?pg/μL和4.3×103?CFU/mL;抗干扰能力实验显示,当鸡肉背景菌群和猪肉背景菌群浓度在106?CFU/mL和4.87×107?CFU/mL时,检出限为6.43×104?CFU/mL。当无菌的鸡肉和猪肉样品中添加N?CFU/25?g甲型副伤寒沙门菌时,经10?h增菌,检测结果为阳性(0<N<10)。实验建立甲型副伤寒沙门菌PCR检测方法具有较好的特异性和灵敏度,有很好的应用价值,可在食品安全领域广泛应用。 相似文献
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