鞣酸还原法制备胶体金及其蛋白标记研究

本文采用单纯鞣酸还原法和传统柠檬酸三钠法分别制备了40nm胶体金,并用它们进行氨苄青霉素全抗原标记实验;通过光谱扫描、纳米粒度仪检测等多种方法对两种胶体金进行蛋白标记前后的质量对比鉴定,通过抑菌试验进一步验证蛋白标记成功,同时用考马斯亮蓝G-250法定量检测蛋白标记量。结果显示:单纯鞣酸还原法制备的胶体金粒径均匀度比传统柠檬酸钠法更佳,可在常温下进行,比需加热的传统柠檬酸钠法操作更加简单易行;鞣酸法胶体金通过加入K2CO3调节pH后进行蛋白标记,标记量为6.8μg/mL,略低于柠檬酸钠法胶体金的8.3μg/mL,胶体金标记前后的光谱曲线及粒度分布图均发生了相应变化,标记物抑菌效果明显。     

氯霉素免疫抗原及包被抗原的制备

采用混合酸酐法合成30:1～10:1 三个不同起始物质的量比的氯霉素免疫抗原(HAP-KLH),采用活泼酯法(EDC-NHS)合成40:1～1:1 七个不同起始物质的量比的包被抗原(HAP-OVA),紫外测定HAP-KLH 偶联比25:1～8:1,HAP-OVA 偶联比23:1～1:3。间接竞争ELISA 实验优化包被抗原,在23:1～3:1 偶联比范围内,氯霉素(CAP) IC50值为36～15ng/mL,随着偶联比的减小而降低,当偶联比低于3:1 则略为上升。确定了包被抗原HAP-OVA 最佳偶联比为3:1。本研究表明包被抗原的偶联比对ELISA 测定IC50 值有重要影响,应合成不同偶联比的包被抗原,选出最佳偶联比。     

酶联免疫快速检测方法在食品安全中的应用

免疫学技术通过抗原和抗体的特异性结合反应,再辅以免疫放大技术来鉴别要检测的物质。免疫方法的优点是样品在进行现场检测,可采用免疫技术进行筛选。由于免疫学方法具有高灵敏、高特异性、快速等优点,所以近年来,该方法在食品安全检测上也应用广泛,本文主要从酶联免疫吸附法（ELISA）、化学发光法、胶体金试纸条这几种方法在食品安全检测中的应用进行介绍。