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1.
利用PCR技术扩增出啤酒工业酵母QY的羟酸还原异构酶基因ILV5 ,在酵母YS5 8中表达时 ,羟酸还原异构酶活力提高 2~ 3倍。将ILV5基因与铜抗性基因插入到YEp3 5 2载体中得到重组质粒 pLZ -5C ,转化QY ,通过铜抗性筛选转化子 ,所得转化子的羟酸还原异构酶的活力明显高于对照菌株QY ,在发酵测试中 ,转化子产生双乙酰的量比原始菌株降低了 60 %。
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2.
利用PCR技术以啤酒酵母QY的染色体为模板扩增出含有乙酰羟酸合成酶(AHAS)基因ILV2的片段,将ILV2基因的内部EcoRI片段连接到整合载体YIp5上,并在该载体的Bam HI-SalI位点插入铜抗性基因CUP1-MT1,构建了YIpCE质粒,将其转化啤酒酵母QY,所得到的转化子AHAS酶的活力比受体菌QY降低75%左右, 在发酵测试中,转化了产生双乙酰的量比原始菌株降低30%。
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