中压液相色谱快速分离纯化Kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶

应用AKTA explorer 100型中压液相色谱快速纯化工艺，系统分离纯化了脆壁克鲁维酵母（Kluyveromyces fragilis）β-D-半乳糖苷酶。K．fragilis发酵生产的菌体细胞经过破碎、离心后的上清液中含有K．fragilis β-D-半乳糖苷酶。粗酶经过AKTA explorer 100中压液相色谱的Hiprep^R 16／10 Source 30Q强阴离子交换柱和Hioad26／60 Superdex凝胶过滤色谱连续两步纯化，酶的回收率为27％，纯化倍数为42。纯化的K．fragilis β-D-半乳糖苷酶在垂直板十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）上，呈现一条染色谱带，表明纯化的酶具有较高的纯度。K．fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶相对分子质量约为60 000。     

渗透性K.1actis细胞内乳糖酶水解牛乳中乳糖的研究

应用填充床细胞反应器，以渗透性K．1actis细胞内乳糖酶连续催化牛乳中乳糖的水解。渗透性K．1actis细胞内乳糖酶的热失活遵循一级反应动力学，40℃时酶的半衰期为9．5h，表观米氏常数为0．39mmol／ml，最大反应速率Vmax为0．188mmol／min。在2．6cm×50cm填充床生物反应器上，渗透性K．1actis细胞内乳糖酶催化牛乳中乳糖水解的适宜体积流速为1．Oml／min，酶反应的适宜温度40℃，反应速率达到动态平衡后生成的葡萄糖的质量浓度为45．2mg／ml，牛乳中乳糖的水解率为91．3％。     

Kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖

低聚半乳糖具有促进肠道有益菌增殖、抗龋齿、低能量等特定的生理功能。研究了酶反应条件对脆壁克鲁维酵母(kluyveromyces fragilis)β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的影响。以乳糖为底物,k.fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的最适温度为40℃,最适pH值为7.0,反应20h低聚半乳糖的产率达到最大。底物初始浓度影响k.fragilis β-D-半乳糖苷酶催化合成低聚半乳糖的产率,乳糖起始浓度由110mg/mL增加到660mg/mL,低聚半乳糖的含量从43mg/mL增加到207mg/mL。     

渗透性K.lactis细胞内乳糖酶水解牛乳中乳糖的研究

应用填充床细胞反应器,以渗透性K．lactis细胞内乳糖酶连续催化牛乳中乳糖的水解。渗透性K．lactis细胞内乳糖酶的热失活遵循一级反应动力学,40℃时酶的半衰期为9．5h,表观米氏常数为0．39mmol/ml,最大反应速率Vmax为0．188mmol/min。在2．6cm×50cm填充床生物反应器上,渗透性K．lactis细胞内乳糖酶催化牛乳中乳糖水解的适宜体积流速为1．0ml/min,酶反应的适宜温度40℃,反应速率达到动态平衡后生成的葡萄糖的质量浓度为45．2mg/ml,牛乳中乳糖的水解率为91．3%。