中压液相色谱快速分离纯化Kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶

应用AKTA explorer 100型中压液相色谱快速纯化工艺，系统分离纯化了脆壁克鲁维酵母（Kluyveromyces fragilis）β-D-半乳糖苷酶。K．fragilis发酵生产的菌体细胞经过破碎、离心后的上清液中含有K．fragilis β-D-半乳糖苷酶。粗酶经过AKTA explorer 100中压液相色谱的Hiprep^R 16／10 Source 30Q强阴离子交换柱和Hioad26／60 Superdex凝胶过滤色谱连续两步纯化，酶的回收率为27％，纯化倍数为42。纯化的K．fragilis β-D-半乳糖苷酶在垂直板十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）上，呈现一条染色谱带，表明纯化的酶具有较高的纯度。K．fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶相对分子质量约为60 000。     

复合膳食纤维固体饮品的研制

以豆腐渣和海带为原料水解制备水溶性膳食纤维(SDF)和多糖,并制备复合膳食纤维固体饮品.用碱法和酶法结合提取大豆不溶性膳食纤维(IDF)和SDF,采用复合酶法制备海带多糖.结果表明:大豆IDF的提取条件为氢氧化钠浓度5%,浸泡时间60min、浸泡温度80℃;纤维素酶添加量为IDF重量的1%,纤维素与水的比例为1:12(W/V),pH为4.5,水解时间为12h,水解温度为40℃,在以上条件下,SDF的产率为36.01%.提取海带多糖条件为加入海带粉重1%的复合酶,复合酶(纤维素酶、果胶酶和蛋白酶)的最佳配比为2:1:2,在pH6.0、50℃酶解6h总多糖得率最高,可达10.71%.     

酪蛋白糖巨肽通过树突细胞发挥免疫调节作用的初步研究

研究用酪蛋白糖巨肽(CGMP)刺激体外培养的小鼠骨髓源树突细胞,观察CGMP对树突细胞成熟的影响,初步探讨CGMP作为功能性食品对免疫的调节作用。实验选用6～8周雄性C57BL/6小鼠,分离培养小鼠骨髓细胞,用重组小鼠白细胞介素-4 (rmIL-4)、重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)诱导其分化,在培养的第6天,分别加入RPMI1640完全培养基作为空白对照, 脂多糖(LPS)为阳性对照和0.1、1、10μg/mL的CGMP 3个实验剂量。培养至第8天收集细胞,进行三色荧光标记,用流式细胞仪检测细胞表面标志：CD11c、CD80、CD86、MHC-Ⅱ。另一方面将第8天的树突状细胞(DCs)和T淋巴细胞共孵育进行混合淋巴细胞反应,96h后用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)检测T淋巴细胞的增殖。结果表明：3个剂量的CGMP均具有刺激DCs成熟的作用,其中CGMP为1μg/mL时,DCs的各种成熟标志均达到最高水平,其中,CGMP对MHC-Ⅱ的刺激作用最为强烈,而MHC-Ⅱ在DCs对外源抗原的提呈中发挥重要作用;混合淋巴细胞反应结果显示各个不同浓度CGMP作用的DCs均具有不同程度的刺激T淋巴细胞增殖的能力,并且DCs:T为1:10时T淋巴细胞的增殖作用最明显。     

防龋齿口香糖中糖醇类成分对CPPs延缓磷酸钙沉淀性能的影响

防龋齿口香糖常用糖醇类成分(木糖醇、山梨醇、甘露醇)及热加工条件等对酪蛋白磷酸肽(CPPs)延缓磷酸钙沉淀形成能力的影响进行研究。研究表明温度在100℃以下时,对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力没有太大的影响。当浓度在2%～14%范围内,甘露醇对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有增强作用;山梨醇对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有减弱作用;而木糖醇在浓度小于6%时对CPPs延缓磷酸钙沉淀的能力有增强作用,大于6%有减弱作用。     

冰核活性菌体蛋白微冻保鲜虾体的应用研究

本文首次把具冰核活性的菌体蛋白碎片应用在基围虾的低温微冻保鲜保藏技术中，保藏过程中，通过对虾体内各物质的检测，来判断保藏虾体的品质及风味的变化。研究结果表明，微冻保鲜20d后，经感官检测、品质检测和风味检测，其虾体的新鲜度变化趋势有相关性，且虾体的保鲜效果好，保存期长等特点；另外能耗低、易于管理和操作。     

乳铁蛋白和乳铁素的抗菌活性比较

牛乳铁蛋白是从牛乳中提取出来的一种铁结合性糖蛋白，牛乳铁素是从牛乳铁蛋白N-端水解下来的25个氨摹酸残荩。它们具有多种乍物学功能，其中的广谱抗菌性尤为引人注目。本实验以牛初乳中提取的乳铁蛋白及其水解产物乳铁素为研究对象，选取大肠杆菌为实验菌株，进行铁饱和乳铁蛋白和缺铁性乳铁蛋白、乳铁素对大肠杆菌生长抑制的比较研究。研究结果表明：铁饱和乳铁蛋白、缺铁性乳铁蛋白和乳铁索的最小抑菌浓度分别为6mg／ml、3mg／ml和15μg／ml，乳铁素的最小杀菌浓度为30μg／ml。乳铁蛋白水解后，经纯化获得的乳铁素，其抗菌能力较缺铁性乳铁蛋白增加200倍，较铁饱和乳铁蛋白增加400倍。     

微生态制剂调节便秘、腹泻人群肠道菌群结构与产短链脂肪酸关键菌属的相关性

为探究微生态制剂对健康、便秘和腹泻人群肠道菌群结构的调节能力。本研究以健康、便秘和腹泻人群 为对象,令其定时、定量摄入水苏糖（stachyose tetrahydrate,Sta）、益生菌纯粉（probiotics power,PP）、益生 菌剂（probotic preparations,PPrs）3 种微生态制剂,共6 周,采集新鲜粪便样本并提取DNA,利用Ion torrent PGM 二代测序技术进行16S rRNA V3区扩增子测序,并用气相色谱检测粪便中的短链脂肪酸（short-chain fatty acids, SCFAs）表达水平,最后联合多变量统计学分析方法对测序数据进行多样性分析。结果表明：绝大多数序列属 于硬壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）,约占总序列数的94.37%。随着微生态制剂的摄入,受 试人群肠道菌群的群落结构多样性明显增加,毛螺菌科（Lachnospiraceae）中的Blautia、Lachnospira以及瘤胃菌 科（Ruminococcaceae）中的Faecalibacterium、Oscillospir等与产SCFAs相关的菌属都明显地增长,其中Blautia和 Faecalibacterium与SCFAs含量呈显著正相关。SCFAs的含量以及肠道中相应菌群的增长与减少都与微生态制剂的成 分相关,在3 组受试人群中,服用Sta组,丙酸含量显著增加,乙酸与丁酸含量也在2 周左右有所增加,并伴随产 SCFAs的菌属快速且大量增长;PP组肠道中只有乙酸含量有所增加,丙酸和丁酸含量呈现降低的趋势,而产SCFAs 的菌属增长较明显;服用PPrs组,乙酸和丁酸含量明显增加,且便秘和腹泻人群在停止服用后,其SCFAs的含量 接近于健康人群,常见的Bifidobacterium、Lactobacillus、Parabacteroides等外源性益生菌均明显增长,可能性致病 菌相对丰度降低,表明服用PPrs对肠道菌群结构的调节作用以及影响更大。此外,根据肠型的分析,Bacteroides和 Prevotella在饮食的共同驱动下会调整并改变肠型,而仅通过所选择的微生态制剂的作用,在驱动肠型改变方面不 显著。综上所述,肠道疾病状态的人群服用微生态制剂后,肠道菌群结构向正常人群的状态调整,菌群多样性和 SCFAs表达水平提高,表现出持续抑制肠道有害细菌生长,促进有益菌的增殖,以此来维持肠道菌群结构的稳态。 经扩增子测序分析获得初步结论为：微生态制剂有改变腹泻、便秘人群肠道菌群整体结构的功效,并且PPrs要比单 一的Sta或PP调整肠道菌群的能力更突出。     

食品非营养成分发挥生物学作用的信号通路

来自饮食和药用植物的天然植物非营养成分(Phc)具有重要的健康保护和临床应用潜力,这已经得到了全世界的密切关注。主要来自果蔬的植物非营养成分是功能性食品的重要来源,而植物非营养成分已经证明在健康保护、抗癌、防癌,特别是预防现代文明病方面表现出巨大的应用潜力。研究证明,Phc 可以上调表达抗化作用的酶类,促进癌症和突变细胞凋亡、调节,特别是下调免疫应答,改变细胞相Ⅰ和相Ⅱ酶的表达,改变细胞因子网络,从而发挥重要的防病治病作用。大量研究表明,Phc 通过和受体相互作用向机体、组织和细胞传递信号。其信号途径主要涉及：丝裂原- 活化蛋白激酶(MAPK)、蛋白激酶C(PKC)、磷酸肌醇3 激酶(PI3K)、Toll 样受体(TLRs)、异常环氧酶-2(COX-2)、活化因子蛋白-1(AP-1)、核因子κB(NF-κB)等。其中,尤其是NF-κB 与AP-1 直接和炎症、免疫调节和癌症相联系。细胞信号的级联放大作用及不同信号途径之间的交谈和相互作用构成了一个非常复杂的调控网络。MAPK 途径异常,或者其下游转录因子的异常都会造成细胞的异常增殖、免疫功能过头、慢性炎症性疾病、现代文明病和细胞恶性转化。因此,抑制这些信号途径可以提供一个避免现代文明病、各种慢性病和癌症的有效战略。本文就这些信号途径进行综述,并提出自己的观点。     

渤海养殖虾冷藏条件

鲜虾在-25℃下冻结,然后分别在-5、-10、-15、-20、-25℃等温度条件下贮存,并在不同的贮存时间对虾的感官指标评价、K值和TVB-N(挥发性盐基氮)值进行测定.结果表明,贮藏温度是影响虾的质量的关键因素,-20℃为比较理想的贮藏温度.K值与TVB-N值有较好的相关性,K值可以作为虾的鲜度评价的辅助指标.包装条件对虾的保鲜效果也会产生影响,当进行真空包装时,感官指标好于普通包装的,并且TVB-N值增加的速度放缓,可以延长虾的保鲜时间.     

冰核活性细菌Xanthomonas ampelinaTS206实验室水平发酵生产工艺条件优化的研究

优化冰核活性细菌XanthomonasampelinaTS206实验室水平发酵生产的工艺条件为将冰核活性细菌应用在工业化生产提供了重要的技术资料。本文对冰核活性细菌XanthomonasampelinaTS206实验室水平的发酵生产工艺条件进行了系统的研究,结果表明这种冰核活性细菌的最适培养条件为:培养温度18℃,装液量40ml/250ml,摇床转速180r/min,接种量3%,发酵液的初始pH8。实验还确定了冰核活性细菌在发酵48h时达到对数生长期。采用上述发酵条件培养XanthomonasampelinaTS206可以使细菌在冰核活性不降低的条件下发酵液的菌体浓度达到2.87×1010个/ml,菌体干重增加了37.7%。