糖基化联合磷酸化降低鲢鱼小清蛋白致敏性的机制

以鲢鱼小清蛋白（parvalbumin,PV）为研究对象,采用糖基化联合磷酸化对其进行修饰,运用光谱、质谱和KU812细胞实验等方法研究修饰后鲢鱼PV抗原表位和致敏性的变化。结果表明：糖基化联合磷酸化修饰可增加鲢鱼PV分子质量,降低游离氨基含量,且改变其二级结构和构象结构;糖基化联合磷酸化修饰后的鲢鱼PV含有8个糖基化位点（K33、K46、K55、K65、K84、K88、K97和K108）和1个磷酸化位点（S56）。糖基化联合磷酸化修饰能显著降低鲢鱼PV与IgG/IgE的结合能力,也能降低KU812细胞中组胺和白介素-6的释放能力。因此,糖基化联合磷酸化修饰通过糖基化和磷酸化位点遮掩鲢鱼PV的线性表位和破坏其构象表位,降低其致敏性。研究结果为开发低致敏性鱼类制品提供重要的理论依据。     

鲢鱼肌肉中不同亚型小清蛋白的鉴定及序列分析

小清蛋白(parvalbumin, PV)是鱼类的主要过敏原,为了解鱼类中不同亚型PV、氨基酸序列及其蛋白修饰情况,以鲢鱼肌肉为研究对象,经分级盐析、高效液相结合尺寸排阻色谱及高分辨质谱分离纯化鉴定PV亚型,并对其氨基酸序列和蛋白修饰进行研究。结果表明,从鲢鱼肌肉中自制的PV含有3种亚型(I、II、III),其平均分子质量分别为12.029 0 kDa、11.581 0 kDa和11.622 0 kDa; PVI、PVII和PVIII的氨基酸序列分别与蛋白质数据库中鱼类PV亚型Q804W2、Q6IMW7和Q9I8V0的氨基酸序列匹配率为74%、100%和99%,且PVII和PVIII分别与已报道的鲢鱼PV亚型gi 209902357和gi 209902355有着89%和88%的相似性。在蛋白修饰中,除PVI只存在酰基化修饰外,其余2个亚型主要存在磷酸化、酰基化、甲基化和泛素化修饰,且PVII的修饰程度明显高于PVIII和PVI。该研究可为鱼类不同PV亚型的提取、纯化和鉴定提供一种新思路,同时为淡水鱼类及其制品安全性的研究提供科学依据。