基于单链抗体的呋喃唑酮酶联免疫检测方法的建立

目的:为快速检测呋喃唑酮(furazolidone,FZD)在动物性食品中的残留量。方法:基于单链抗体的间接竞争酶联免疫吸附实验法建立了FZD检测方法。结果:最佳抗原工作质量浓度为2μg/m L,最佳抗体稀释倍数为1∶500,一抗最佳反应时间为60 min,二抗最佳反应时间为45 min,四甲基联苯胺最佳显色时间为20 min。FZD检测试剂盒在10~100 ng/m L范围具有较好的线性关系,IC50值为13.01 ng/m L,检出限为1.28 ng/m L,回收率为73.38%~84.52%。结论:与抗FZD单克隆抗体相比,所建立的检测试剂盒检测范围更广,且具有很高的灵敏度以及很好的特异性和稳定性。     

抗呋喃唑酮单克隆抗体的制备及其应用

为实现呋喃唑酮（furazolidone,FZD）的快速定量检测,本研究制备了抗FZD全抗原的单克隆抗体,建立了抗FZD的单克隆抗体酶联免疫检测方法。结果表明,FZD单克隆抗体在质量浓度为10～500 ng/mL范围具有较好的线性,IC50值为0.06 μg/mL,最低检测限为6.92 ng/mL,对于其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物均不存在交叉反应。该方法重现性较好,平均误差为6.54%,回收率为76.84%～88.31%。     

核糖体展示技术筛选抗呋喃唑酮单链抗体

目的 运用核糖体展示技术筛选高特异性抗呋喃唑酮(furazolidone,FZD)单链抗体，并进行初步分析。方法 提取小鼠杂交瘤细胞总RNA，利用反转录PCR及重叠延伸(splicing by overlap extension,SOE)-PCR技术合成V_H-linker-V_L单链抗体文库。采用TNT T7 Quick for PCR DNA试剂盒对单链抗体文库进行体外翻译及筛选，经过三轮筛选富集目的基因，对目的基因进行原核表达及纯化后，初步分析其特异性及亲和力。结果 获取1株特异性较高的单链抗体FZD-ScFv1,IC₅₀值为13.01 ng/mL，与呋喃它酮、呋喃妥因、氨基脲、呋喃西林及其衍生物之间的交叉反应率均小于1%。结论 利用核糖体展示技术成功获得亲和力较好的单链抗体，该抗体可用于建立ELISA法，为FZD残留量的快速检测提供了新的思路。