羧甲基化龙眼肉多糖制备工艺优化及其抗氧化、免疫活性

利用响应面法优化羧甲基化龙眼肉多糖制备工艺,并测定其体外抗氧化活性,同时建立小鼠免疫低下模型,对所得多糖进行体内免疫调节活性研究。以羧甲基取代度为指标,通过单因素试验对一氯乙酸(monochloroacetic acid,MCA)浓度、反应温度、反应时间进行分析,得到羧甲基化龙眼肉多糖最佳制备条件为MCA浓度1.2 mol/L、反应温度73℃、反应时间3.2 h,取代度可达1.053。抗氧化活性研究表明,在质量浓度为200~3 200μg/mL范围内,龙眼肉多糖(polysaccharide from Dimocarpus longan pulp,LYP)、羧甲基化龙眼肉多糖(crboxymethylated polysaccharide from Dimocarpus longan pulp,CM-LYP)的抗氧化能力与质量浓度呈剂量依赖关系,当剂量质量浓度达3 200μg/mL时,LYP、CM-LYP对羟自由基清除率分别为(42.35±5.67)%、(84.39±4.47)%,对超氧阴离子自由基的清除率分别为(51.91±5.34)%、(87.91±7.32)%,对脂质过氧化的抑制率分别为(67.91±5.72)%、(79.85±2.92)%、对H2O2诱导的红细胞溶血的抑制率分别为(47.23±3.5)%、(54.66±2.83)%,表明羧甲基的引入增强了龙眼肉多糖的抗氧化活性;体内免疫活性实验表明,羧甲基化龙眼肉多糖可提高免疫抑制小鼠的脾脏指数、促进血清溶血素形成、提高血清和脾脏中溶菌酶含量及调节Th1/Th2平衡,与修饰前龙眼肉多糖相比,羧甲基化龙眼肉多糖具有更好的免疫调节作用。     

响应面试验优化龙眼肉多糖乙酰化工艺及其抗氧化活性

对龙眼肉多糖进行乙酰化修饰最佳工艺研究,采用乙酸酐法制备乙酰化龙眼肉多糖,以取代度为指标,采用响应面法对工艺条件进行优化,并研究乙酰化龙眼肉多糖的体外抗氧化活性。结果显示,龙眼肉多糖的最佳乙酰化条件为：乙酸酐-多糖物质的量比（投料比）10.2∶1、反应温度42 ℃、反应时间30 min。该工艺条件下龙眼肉多糖乙酰化取代度达到0.443。乙酰化龙眼肉多糖能够清除羟自由基、抑制脂质过氧化以及H2O2诱导的红细胞溶血,半数抑制浓度（IC50）分别为702.41、646.04 μg/mL和380.11 μg/mL,表现出比未修饰龙眼肉多糖更强的抗氧化活性。