酸奶中长双歧杆菌PCR计数方法的建立

根据细菌保守序列设计一对通用引物,扩增细菌16S rDNA序列,作为阳性标记;根据长双歧杆菌菌株的16S rRNA和23S rRNA之间的间区基因序列设计定性PCR引物。用BBL琼脂平板对长双歧杆菌混合发酵的酸奶进行培养计数,随机挑选部分长出的菌落,提取DNA做PCR鉴定。将PCR技术与传统平板计数技术结合起来,初步建立酸奶中长双歧杆活菌计数方法。抽提方法操作简便、高效、灵敏,决定着PCR计数方法的准确高效,本研究着重研究了菌体DNA抽提方法的影响因素,以及抽提方法通用性,同时也研究了PCR引物的特异性。将PCR技术与传统平板计数技术结合起来,初步建立酸奶中长双歧杆活菌计数方法。     

开菲尔粒中高产蛋白酶菌株的筛选及培养基优化

采用脱脂乳粉平板初筛法,从开菲尔粒中分离得到10株有明显水解圈的蛋白酶产生菌,对脱脂牛奶平板上透明圈/菌落直径比(HC)>2.00的KX-1、Kx-3、Kx-7三株菌通过时间-酶活曲线进行复筛,得到酶活最高(发酵30 h、酶活146.43 U/mL)的菌株Kx-7。利用单因素试验对培养基进行优化,在此基础上利用Plackett-Burman(PB)试验设计法对影响蛋白酶活性的重要因素进行筛选,结果表明果糖,酪蛋白和Triton X-100,3个因素对产酶影响显著。