牛凝乳酶原基因在大肠杆菌中的高效表达及活性检测

以实验室保存的携带凝乳酶原前体基因的重组载体pMD 19-T/bPPC为模板克隆凝乳酶原基因,经双酶切后与载体pET-30a连接得到重组载体pET-30a/bPC,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE检测目的蛋白表达情况。重组蛋白经变性/复性、DEAE-Sepharose Fast Flow纯化和自催化后检测凝乳活性。结果表明,重组凝乳酶原基因在大肠杆菌中高效表达,表达量占菌体总蛋白的68%,采用Arima K方法检测,其凝乳活力达到80 SU/mL。因此,通过大肠杆菌表达系统大量制备具有生物活性的重组牛凝乳酶原的策略是可行的,研究结果为弥补国内天然牛凝乳酶的短缺提供一种途径。     

LiaX家族表面蛋白LPL9＿0968在副干酪乳杆菌L9胆盐胁迫应激中的作用

副干酪乳杆菌L9中假定表面蛋白LPL9＿0968在胆盐胁迫下转录水平上调9.67倍。经生物信息学分析发现,LPL9＿0968属于LiaX家族的表面蛋白,与粪肠球菌中LiaX蛋白序列相似度高达61.96%,且该家族蛋白中存在多个天冬酰胺-甘氨酸(NG)保守位点。本试验构建的LPL9＿0968所在操纵子基因插入失活突变体,在0.075%混合牛胆盐胁迫下突变体胆盐耐受能力下降10倍,表明该LiaX家族蛋白参与L9胆盐胁迫抗性机制。在单一组分胆盐胁迫中突变菌株表现出对甘氨酸脱氧胆盐较强的敏感性,在3.0%牛磺酸胆盐、0.4%牛磺酸脱氧胆盐、2.0%甘氨酸胆盐、0.075%甘氨酸脱氧胆盐胁迫下,存活率分别降低了1.95,2.85,2.05倍和8.21倍。Zeta电位试验和扫描电镜结果表明突变株在胆盐胁迫下细胞膜电位增大,并出现更为严重的萎缩现象,而分子对接表明该表面蛋白与胆盐不同组分均存在相互作用,LPL9＿0968很可能通过感受胆盐信号分子,调控细胞膜表面蛋白,维持细胞膜的稳定性,从而提高菌株胆盐抗性。本试验首次探究乳酸菌中LiaX家族表面蛋白的功能,证明了其在菌株胆盐胁迫抗性中的重要性,为其...     

红曲鲊鱼中原生乳酸菌菌株筛选及发酵工艺优化

目的:解决传统自然发酵鲊鱼发酵工艺不确定、发酵周期长、品质不稳定等问题。方法:从低盐红曲鲊鱼中分离出乳酸菌,考察菌株的抑菌能力、耐盐能力及产酸能力,筛选出适合发酵的乳酸菌,对红曲鲊鱼进行接菌强化发酵,并对发酵工艺中红曲米粉添加量、腌制时食盐添加量及发酵温度进行优化。结果:共分离出22株对大肠杆菌或金黄色葡萄球菌具有抑制作用的片球菌,其中戊糖片球菌P-56对大肠杆菌的抑菌效果最好,且对胆盐及酸具有较高的耐受能力;经过接菌发酵及工艺优化,发酵4 d,鲊鱼pH值下降至4.42,TCA-可溶性肽含量为434.99μmol/g,感官评分为45.7。结论:乳酸菌发酵红曲鲊鱼的最佳工艺条件为：腌制盐添加量4%,红曲米粉添加量4%,发酵温度32℃。     

我国发酵鱼制品菌群组成与风味代谢相关性研究进展

发酵是一种传统的鱼类贮藏方式,在发酵过程中,原料或环境中携带的微生物通过自身代谢能够促进碳水化合物、蛋白质及脂肪的分解利用,从而生成丰富的风味物质。不同地区的人们通过添加不同的原辅料以及控制盐含量、发酵温度、发酵时间等条件,得到风味、形态均大不相同的发酵鱼制品,同时各类发酵鱼制品中微生物组成的差异性导致其特征性风味物质的组成也各不相同,因此研究不同发酵鱼制品中的菌群组成,探究微生物代谢与特征性风味物质形成的相关性成为当前研究的热点之一。本文针对国内不同类型发酵鱼制品,对其发酵工艺、菌群组成、特征性风味物质及产生机制的相关研究进行整理和讨论,分析发酵条件对菌群组成、进一步对风味形成的影响;同时对比不同微生物与风味物质相关性研究方法的特点,为今后探索发酵鱼风味形成机制及对发酵鱼风味进行精准调控提供参考方向。