丝素蛋白β-折叠含量影响细胞生长的研究

分析在乙醇处理前后丝素蛋白(SF)与丝素肽(SFP)二级结构含量变化,及对细胞生长的影响。采用醇溶法提取制备SF,由中性蛋白酶酶解得SFP,40%乙醇分别处理SF与SFP,得ET-SF、ET-SFP。将SF、SFP、ET-SF、ET-SFP分别采用过滤除菌处理后再分别在1 mg/mL、0.5 mg/mL浓度条件下,检测其对人肝癌细胞(HepG2)、人宫颈癌上皮细胞(Caski)的生长影响,利用相对增值率评价其毒性,圆二色谱法检测二级结构含量。结果表明:乙醇处理前后SF为非浓度依赖型,对细胞生长均有促进作用且趋势相同;乙醇处理前后SFP为浓度依赖型,对细胞均有抑制作用,当β-折叠含量增加,SFP对细胞毒性作用增加。     

丝素肽络合Ca~(2+)含量影响细胞生长的研究

研究丝素肽(SFP)络合Ca~(2+)含量对人正常肝细胞L02生长的影响。采用CaCl_2-乙醇-水三元体系制备丝素蛋白(SF),并获得不同Ca~(2+)含量的SFP后进行相对分子质量分级;采用EDTA滴定法测定SFP中Ca~(2+)含量,细胞增殖率评价其细胞毒性,圆二色谱(CD)检测二级结构。结果表明:随透析时间(12、24、36 h)增加,SFP中Ca~(2+)含量分别为16.00%、9.60%、0.40%,逐渐减小,对L02的生长作用由促进转变为抑制,其中在SFP相对分子质量大于8 kD时尤为明显,L02细胞增殖率从(118.68%±3.65%)减小到(59.78%±1.70%),对应SFP二级结构中3.43%的α螺旋和5.35%的无规则卷曲转变为β折叠。当SFP应用于组织工程支架领域时,络合较高Ca~(2+)含量的SFP更有利于细胞的增殖。