市售鸡肉中四环素耐药菌污染特征初探

为描述鸡肉产品中四环素耐药菌的污染状况,初步评价四环素耐药基因通过市售鸡肉产品进行迁移的潜在风险。在上海13个区采集55个冷冻鸡肉样品、50个冷鲜鸡肉样品和3个现宰鸡样品,分离对四环素或强力霉素不敏感的细菌(Tet~(is)或Dox~(is)),研究其耐药特征,并筛查7种四环素耐药基因和一类整合酶基因int I。结果表明,所有样品均分离出Tet~(is)菌,菌落数为1.00×103~1.51×108CFU/g;从96.19%的样品中分离出Dox~(is)菌,菌落数为5.01×10~7.76×106CFU/g;两类抗生素不敏感菌的数量在现宰样中最高,冷鲜样次之,冷冻样最低。738株Tet~(is)和Dox~(is)菌普遍对多种抗生素不敏感,其中165株菌中耐药基因tet A,tet B,tet C,tet E,tet G,tet L,tet M和int I的检出率分别为9.70%,20.00%,4.24%,9.70%,15.80%,29.70%,61.80%和46.10%。耐药基因的寄主菌包括埃希氏菌、葡萄球菌、肠球菌、奇异变形杆菌、不动杆菌、鞘氨醇杆菌和土地杆菌等,大多数菌的四环素最小抑菌质量浓度大于64μg/m L。综上,市售鸡肉产品中四环素耐药菌污染较为严重,可能包含巨大的耐药基因池,存在潜在的迁移风险。     

冷鲜鸡接触者手部抗生素耐药菌菌群多样性分析

为探索冷鲜鸡表面抗生素耐药菌在生产加工和消费加工中向人迁移的潜在风险,利用选择性培养和IonS5TMXL测序平台对6位冷鲜鸡接触者手部的四环素耐药菌(TETr)和磺胺耐药菌(SULr)进行计数和多样性分析。结果表明,与冷鲜鸡接触后,操作者手部的两类耐药菌显著增加至4.80×10～2.66×10~6 CFU/cm~2;TETr菌和SULr菌中各注释出21,19个菌属的共有菌群,其中,不动杆菌等9个属的细菌已被证实在禽源和人源分离株中均存在多重耐药性,且耐药基因在禽源和人源细菌间可能发生水平迁移;而布丘氏菌等14个菌属的禽源细菌的耐药特性尚无研究报道。研究证实TETr菌和SULr菌在直接接触中会从冷鲜鸡肉产品表面迁移至操作者手上。     

鸡源细菌中5种四环素耐药基因多重PCR检测方法的建立

为建立一种同步检测鸡源细菌中5种四环素耐药基因tetA、tetD、tetG、tetS和tetX的多重聚合酶链式反应(PCR)方法,优化了多重PCR体系的引物和Taq DNA聚合酶浓度及退火温度等参数,并考察了方法的灵敏度、特异性和适用性。建立的多重PCR反应技术的最佳反应体系为:混合DNA模板5μL,Taq酶1μL,tetA和tetX的正反向引物各0.5μL,tetG、tetD和tetS的正反向引物各1.0μL,dNTP4μL,MgCl24μL,10×PCR反应缓冲液5μL,最终用dd H2O补齐至50μL;反应程序为:95℃预变性5min;95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环;72℃延伸10min。该方法的灵敏度为102 CFU/mL,且能广谱地检测多种鸡源细菌中的5种四环素耐药基因。与传统的单重PCR方法相比,该多重PCR技术快速高效、适用性广。     

3种培养基对鸡肉产品中两类耐药菌培养的影响

目的:评估不同培养基对鸡肉产品表面四环素耐药(T^r)菌和磺胺耐药(S^r)菌菌群的培养效果差异。方法:基于高通量测序技术，分析分别在脑心浸液肉汤(BHI)、胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)和平板计数琼脂(PCA)3种培养基上培养获得的冷鲜鸡和鸡肉熟食表面T^r菌和S^r菌的菌群结构及丰度。结果:在冷鲜鸡表面鉴定到的101个属的耐药细菌中，仅在BHI、TSA和PCA培养基上获得培养的特有T^r菌属各有30,5,3个，特有S^r菌属各有9,8,14个；在鸡肉熟食样品表面鉴定到的50个属的耐药菌中，3种培养基上的特有T^r菌属分别为3,2,1个，特有S^r菌属分别为1,6,0个。耐药菌属丰度差异的Metastat分析结果表明，BHI和TSA对耐药菌群的结构影响具有较高的相似性，冷鲜鸡表面4种T^r菌(气单胞菌属Aeromonas spp.、水栖菌属Enhydrobacter spp.、乳杆菌属Lactobacillus...