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由副溶血性弧菌引起的食品中毒事件频繁爆出,开发一种简单、快速且能大规模现场检测的方法对确保食品安全、避免经济损失具有重要意义。该研究成功开发了针对副溶血性弧菌现场快速检测的时间分辨荧光免疫层析技术(TRF-LFIA)。该方法将时间分辨纳米荧光微球(EuNPs)标记副溶血性弧菌单克隆抗体形成可以作为特异性免疫荧光探针的微球抗体偶联物,通过测定探针与目标致病菌结合后的荧光信号值来实现对目标致病菌的定量检测。该研究开发的TRF-LFIA方法对副溶血性弧菌检测的灵敏度为8.2×102 CFU/mL,视觉检测限为1.2×104 CFU/mL,线性范围为1.8×103~1.8×107 CFU/mL,回收率为84.25%~105.13%,变异系数(CV)为2.56%~9.14%,并且对其他7种主要食源性致病菌株检测未发生交叉反应。该研究所建立的TRF-LFIA检测方法具有灵敏度高,操作简单、快速,重复性、特异性好等优点,为针对副溶血性弧菌的现场快速检测提供了一种有力的检测工具。 相似文献
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河豚毒素直接竞争ELISA检测方法的研究 总被引:10,自引:1,他引:9
本研究应用直接竞争ELISA法对河豚毒素(tetrodotoxin,ITX)进行快速检测.用过碘酸钠氧化法合成酶标记抗原HRP-OVA-TTX),用直接ELISA方法对合成的酶标记抗原进行鉴定表明其与抗TTX单克隆抗体具有特异性反应.在此基础上建立了包被单抗的直接竞争ELISA方法.该方法对TTX的检测限可达到1.1μg/L,IC50为20.4μg/L,线性范围3.3~137μg/L,批内变异系数小于6.25%,批间变异系数小于7.34%.对鲫鱼的肌肉组织添加TTX标准品,回收率为65%~93.2%,变异系数为9.41%~12.77%. 相似文献
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幽门螺杆菌全菌抗原对母鸡的免疫原性 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 研究幽门螺杆菌 (Hp)全菌抗原的免疫原性及Anti Hp IgY的预防和治疗作用。方法 用超声Hp波粉碎的Hp抗原免疫产蛋母鸡 ,通过IHA和ELISA间接法检测母鸡的免疫应答。用SDS PAGE分析Hp全菌抗原 ,并用抗Hp IgY做免疫印迹。结果 母鸡免疫成功率为 10 0 %。初免 45d后 ,抗Hp IgYIHA效价为 1∶10 2 4,ELISA效价超过 1∶45 0 0 0。Hp抗原的SDS PAGE显示有 2 6条蛋白染色带 ,其中主带有 10条 ,免疫印迹表明Hp的超声粉碎物特异性抗原蛋白带相对分子质量为 70 0 0 0、6 6 0 0 0、42 0 0 0、3430 0、2 95 0 0、2 70 0、185 0 0。结论 本研究为工业化制备抗Hp IgY奠定了基础 相似文献
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双抗夹心ELISA检测食品中大肠杆菌O157:H7方法研究 总被引:10,自引:0,他引:10
研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法检测大肠杆菌O157:H7,正交试验分析表明,捕获抗体于37℃包被2h、不封闭、抗原与捕获抗体于37℃结合2h、检测抗体浓度为0.25mg/ml、与抗原于37℃结合1h为最优反应条件。该方法对纯培养菌液检出限为105CFU/ml,具有良好的敏感性及特异性。染菌样品经在EC增菌液中选择性培养后进行双抗夹心ELISA检测,接种量为0.1~1CFU/g(ml)的样品在培养12h后可检出阳性反应,1~10CFU/g(ml)的样品在培养8h后可检出阳性反应。 相似文献
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建立了金属离子指示剂介导的核酸扩增技术用于水产品中副溶血弧菌的检测,同时将检测结果与PCR方法进行比较。结果表明,金属离子指示剂介导的核酸扩增技术能够在恒温65℃、60min内完成对副溶血弧菌tlh基因的特异性检测,检出限达到1.35CFU/mL,是PCR检测限的10倍;阳性检测结果呈亮绿色,明显区别于阴性橘黄色,通过目视颜色的改变即可判断;检测48份样品过程中,金属离子指示剂介导核酸扩增方法检出45份,PCR方法检出34份阳性样品,灵敏度分别为93.8%和70.8%,阴性预测率分别为76.9%和41.7%。金属离子指示剂介导恒核酸扩增法具有高效、高特异性、高灵敏度特性,可满足实地检测需要。 相似文献
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