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以高纯度的PCT抗原免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体并以此抗体作为包被抗体,通过包被液和封闭液的选择及条件优化,最终建立PCT双抗体夹心ELISA的血清学定量检测方法.建立的PCT双抗体夹心ELISA检测方法的灵敏度和特异性分别达到95.6%和97.8%,最佳的包被抗体浓度为400 ng/m L,酶标二抗的稀释度为1∶8 000,最适宜的缓冲液以及反应条件分别为包被液使用p H9.6的0.05 mol/L CB 4℃下包被12 h,封闭液使用0.6%BSA 37℃下封闭2 h.建立的PCT双抗体夹心法与罗氏试剂盒的定量检测结果呈现良好的相关性,是一种灵敏度高、特异性强、稳定可靠的血清学定量检测方法,为进行PCT的深入研究奠定了基础. 相似文献
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通过构建重组表达质粒,诱导表达纯化麻疹病毒N蛋白.将麻疹病毒N蛋白基因片段与载体pET-32a(+)相连接,通过PCR方法扩增获得重组质粒pET-32a(+)/N,然后将重组质粒转入大肠杆菌E.coliBL21(DE3)内,并优化诱导表达时间、温度、诱导剂浓度等条件.SDS—PAGE和Western blot蛋白印迹检测表明,麻疹病毒N蛋白分子质量约为60kD,表达产物用Ni—NTA亲和层析和DEAE纯化后,纯度达90%. 相似文献
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