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利用PCR方法从假单胞杆菌基因组DNA扩增胞外褐藻胶裂解酶的全基因和缺损片段,构建表达质粒pQE30-aly32和pQE30-aly165,并在大肠杆菌M15中成功表达。表达的重组蛋白大部分存在于包涵体中,经洗涤,变性和复性,镍柱亲和层析纯化,获得了电泳纯的Aly32和Aly165。酶活性检测发现,仅Aly165具有较强活性,108 u/mg,该酶对poly(G)和poly(M)都有活性,对poly(M)更敏感。对表达体系进行优化,确定IPTG的最佳浓度为0.6mmol/L,最佳诱导菌液密度OD600为0.5~0.6,最佳表达时间为3h,28℃低温诱导可以提高重组蛋白的可溶性,可溶性蛋白相对表达量达到25%。 相似文献
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1抽油杆偏磨原因分析
造成抽油井管、杆偏磨的直接原因是由于抽油杆在井下受多种力的作用产生交变载荷,受力状况复杂,抽油杆柱不是刚性体,在抽油过程中会发生不同程度弯曲,与油管接触产生偏磨。另一个原因是由于抽油杆、油管弯曲或倾斜,使抽油杆柱与油管内壁接触摩擦,在深抽井中, 相似文献
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