高压快速冷冻技术在两种培养细胞超微结构中的应用

高压快速冷冻(high-pressure freezing,HPF)能使样品在高压下毫秒内从室温降到液氮温度,所有分子瞬间固定在原位,随后启用冷冻置换(freeze substitution,FS),在低温下缓慢固定的同时用有机溶剂替代样品中的水分,从而保存样品的细微结构接近自然状态.本文使用高压快速冷冻/冷冻置换方法对草地贪夜蛾细胞(sf9细胞)和感染沙眼衣原体的小鼠成纤维细胞(McCoy细胞)进行电镜制样观察,同时对比传统化学固定两种细胞超微结构的差异.结果发现,利用HPF/FS技术,两种细胞中的膜结构、细胞骨架结构更能良好地保存,核膜、高尔基体和囊泡膜平滑完整,无皱缩或断裂,细胞形态更接近自然状态.     

沙眼衣原体结构的电子显微学研究

沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）,可导致沙眼、感染性致盲,且是引起泌尿生殖道感染等性传播疾病的主要病原体之一。本文利用常温常规电镜制样方法和电子断层成像技术,体外对临床上分离得到的沙眼衣原体进行了研究。研究发现,此种衣原体在发育过程中,胞质发生了一系列的变化,首先RB胞质浓缩变小形成具有类核的IB,随后发育成高度致密且体积较小的EB。伴随此过程,膜也发生了变化：首先RB的膜易皱缩,EB的膜则较坚固;其次RB发育成EB时,多余外膜会形成囊泡;此外,其外膜结构随着RB发育为EB而变厚并更稳定。     

伊蚊培养细胞中发现的一株新浓核病毒

在伊蚊 (Ａｅｄｅｓａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ)Ｃ6 36细胞株上培养登革病毒时 ,发现了一潜伏在这种细胞内的新病毒株 ,我们对此病毒进行了初步研究 ,并命名为Ｃ6 36ＤＮＶ。这种病毒在细胞未被登革病毒感染时 ,并没有明显影响细胞的生长 ,细胞仍能正常传代。但当细胞受登革病毒感染时 ,这种病毒能大量繁殖 ,从而拖延、影响登革病毒对Ｃ6 36细胞的破坏和致病作用。对正常Ｃ6 36细胞的研究 :对正常细胞进行分离提纯 ,不能分离得到病毒粒子 ,超薄切片、透射电镜观察 ,发现细胞发育正常 ,细胞核染色均匀 ,细胞质内细胞器完整、丰富 (图 1)。对未…     

BmCPV-MAb／Fab复合物三维结构的初步研究

我国是世界上最大的茧丝绸生产国和供应国。然而，蚕病对养蚕业造成很大的危害。家蚕质多角体病毒(BmCPV)是引起蚕病的主要病原体之一，对该病毒的生化研究和三维结构研究，对于阐明病毒致病机理和进行生物防治具有重要意义。本实验室从1996年起开始应用单颗粒技术和分子生物学技     

SARS CoV感染Vero E6的电镜研究

我们用广州地区临床确诊的SARS病人的咽拭子标本感染Vero E6细胞,将感染3天即严重病变的Vero E6细胞进行3％戊二醛和l％锇酸双固定,经乙醇脱水后用Spurt包埋剂包埋。样品进行超薄切片和用醋酸氧铀和柠檬酸铅双染色后即可用透射电子显微镜进行观察。正常的Vero E6细胞也同上操     

一种用于标记蓝宝石盘的高压冷冻制样辅助装置

高压冷冻技术(high pressure freezing,HPF)是近年来出现的一种可以更有效保存样品原始结构的制样方法.本文介绍了针对高压冷冻制样过程中,无法区分用于培养细胞的蓝宝石盘正反两面的问题,使用3D打印技术制作模具进行喷涂特殊样式的碳膜标记,从而得以区分蓝宝石盘正反面,提高制样成功率.     

中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)核酸的结构研究

本文分别应用冷冻电镜与计算机三维重构技术和分子生物学技术对中蜂囊状幼虫病病毒（CSBV）的核酸的三维结构和核酸一级结构进行测定和分析，并对两者之间关系进行探索。     

冷冻电镜单颗粒重构中病毒三维显示的校正

利用冷冻电镜电子显微技术和单颗粒三维重建方法获得家蚕质多角体(BmCPV,分辨率:1.3 nm)、中蜂囊状幼虫病病毒(CSBV,分辨率:2.5 nm)、C6/36浓核病毒(C6/36DNV,分辨率:1.4 nm)的三维结构体数据,用空间低通滤波对体数据矢量场进行处理并进行三维显示,较之原来的显示方法,提高了信噪比(SNR),增强了显示稳定性与显示质量.病毒每个表面细节和轴上突起更加清晰可见.     

冷冻电镜单颗粒重构中的病毒三维显示

利用冷冻电镜显微技术和单颗粒三维重建方法获得BmCPV（家蚕质多角体）;CSBV（中蜂囊状幼虫病痛毒）;C6／36DNV（C6／36浓核病毒）的三维结构体数据,用空间低通滤波对体数据矢量场进行处理并进行三维显示,较之原来的显示,提高了信噪比,增强了显示稳定性与显示质量、病毒每个表面细节和轴上突起更加清晰可见。     

含水纳米材料冷冻电镜直接成像研究

对细菌、聚合物胶束、载药脂质体和脂质体立方晶等含水纳米材料进行冷冻电镜直接成像研究.结果表明,与负染色技术相比,文中利用冷冻电镜技术观察到了保存更完整的细菌膜结构和细菌的部分内部结构、精细的多层聚合物胶束结构、包裹在脂质体内的纳米药物以及脂质体立方晶的晶格结构.与负染色技术相比,冷冻电镜技术能避免染色假象、真空变形等缺陷,更真实地反映了有关纳米材料的原有结构特点.