重组Thermus thermophilus DNA聚合酶表达纯化及其在RT-PCR中的应用

目的研究重组ThermusthermophilusDNA聚合酶的表达、纯化和应用。方法提取Thermusthermophilushb8基因组DNA作为模板,PCR扩增TthDNA聚合酶基因后,克隆至pET28a表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用His-BindQuickCartridge300纯化重组TthDNA聚合酶His-tag融合蛋白。提取Thermomonosporafusca总RNA,用一管法RT-PCR扩增E2cd基因,检测重组TthDNA聚合酶RT-PCR活性。结果大肠杆菌表达TthDNA聚合酶,分离出的电泳纯重组TthDNA聚合酶His-tag融合蛋白相对分子质量为94000,表达产量为200000U/L。一管法RT-PCR可扩增出850bp长度的E2cd基因。结论重组TthDNA聚合酶已成功地表达和纯化,并用于RT-PCR。     

接入弱交流系统的背靠背直流输电系统控制策略改进

背靠背直流工程逆变侧采用定熄弧角控制时,整流侧和逆变侧耦合关系较强,但换流变压器分接开关动作次数少;而采用定直流电压控制时,耦合关系较弱但分接开关动作次数多。在分析相关控制策略优缺点的基础上,提出了改进控制策略,逆变侧通过熄弧角控制直流电压为指令值,直流电压指令值随直流功率变化,分接开关控制熄弧角在正常范围内。该控制策略保留了定熄弧角控制和定直流电压控制的优点。提出整流侧和逆变侧在分接开关动作时预估无功小组是否会因分接开关动作而投切,进而确定分接开关和无功小组动作的先后关系,防止了分接开关的反复动作。算例表明该控制策略可以减少背靠背工程无功小组投切和分接开关动作次数,减小逆变侧无功小组投切电压波动,适用于接入弱交流系统的背靠背工程,长距离直流输电工程也可以借鉴文中控制策略。     

生态城绿色街区可持续发展指标系统构建

分析了可持续发展理论的研究进程和我国生态城建设实践中的问题,以可持续发展指标的理论内涵和研究方法为基础,从指标的要素选择、具体内容确定、实施策略、指标测评和修正等方面建立生态城绿色街区可持续发展指标系统。以指标系统为指导原则,为提出具有实效性的生态城市规划策略提供科学依据,弥补当前生态城规划在中微观层面研究的不足,为生态城的规划建设提供科学、有效的指导。     

浅谈教材编与善对外汉语离合词教学

离合词教学是对外汉语教学中的重点和难点。本文试图从教材编写的角度出发,以生词表中离合词的展示、安排离合词出现的先后顺序、离合词的搭配与扩展问题以及课后习题的处理等方面作为切入点进行思考,旨在对这一难点提出一点建议。     

高密度中心城区暴雨防灾规划体系及策略研究

系统总结了城市暴雨灾害的特征和诱因,建立了高密度中心城区暴雨防灾规划体系,根据中心城区特征提出了基于生态安全理念的土地效能优化、基于绿道理论的绿地空间规划、基于低影响理论的暴雨调节系统、结合地下空间开发的暴雨管网建设等常态暴雨防灾策略,探索了基于灾时应急思维的暴雨防灾策略以及法律规范、技术条件、财政投入等暴雨防灾支撑策略,力图有效指导中心城区的生态安全和可持续发展。     

基于幅度压缩滤波的清浊音分类及基音估计

该文针对传统算法在实环境(不同噪声类型和信噪比)下容易发生清浊误判和基音估计错误问题,提出一种基于幅度压缩基音估计滤波(PEFAC)的清浊音分类及基音估计方法。首先,通过PEFAC削弱语音的低频噪声,提取出基音谐波;然后,采用基于对称平均幅度和函数的脉冲序列加权算法(SIM)确定谐波数目;最后,利用动态规划估计出基音,用基于3元素特征矢量的高斯混合模型对清浊音进行分类。仿真结果表明,在实环境下,所提方法能有效抑制清浊误判及基音估计错误现象的发生,性能优于传统方法。     

基于景观生态思维的绿色街区城市设计策略

新型城镇化背景下,生态城市理论和实践研究再次成为学界关注的焦点,城市设计作为城市发展和建设的重要技术手段,其地位和作用进一步显现。针对当前城市建设中的生态性和实效性需求,探讨城市设计、建筑设计、景观设计相结合的一体化设计思路,以生态城市设计和绿色街区的既有研究为基础,构建绿色街区景观生态安全格局。从绿色开放空间、绿色街道、绿色建筑等方面提出景观生态导向下的绿色街区城市设计策略,为城市可持续发展目标的实现提供具有实效性的技术方法和途径。     

应对暴雨内涝的城市建成环境韧性单元研究——基于多学科研究边界的比较

近年来我国暴雨内涝灾害频发,造成巨大的人员伤亡和财产损失。已有应对暴雨内涝的城市韧性研究多为基于不同基本单元的风险评价研究,多个研究之间往往难以进行横向比较,需进行韧性单元的统一划定。通过文献研究与暴雨内涝时间线梳理,确定气象学、城乡规划学、景观学、水利工程、防灾减灾科学与工程等暴雨内涝相关学科领域。通过分析总结多学科应对暴雨内涝的城市建成环境边界条件,筛选确定行政区划、流域/排水分区、河流水系、道路界线作为应对暴雨内涝的韧性单元边界条件。运用SWMM模型对典型地块进行模拟验证,结果显示单元划分方法的面积、尺度标准满足暴雨内涝研究精度要求,在此基础上提出韧性单元划定的基本原则,并以典型地块为例完成韧性单元划定。     

既有城区生态韧性因子模拟与评价体系构建

结合我国城市韧性研究的重要需求,反思快速城镇化进程中不合理的建设活动导致的诸多城市生态问题,以天津市既有城区为主要研究对象,重点研究暴雨、热浪、空气污染三类影响较大且具有典型性的生态扰动类型,采取定性与定量结合的方法,探索各类型生态扰动与空间环境因子间的耦合关系,提取影响较强的相关因子,建立完整的既有城区生态韧性评价体系,为提升城市生态韧性水平和人居环境质量提供参考与决策支持。     

应用pCYB1载体表达胰高血糖素

目的 研制基因工程胰高血糖素。方法 利用pCYB1表达载体,亚克隆胰高血糖素基因后转化于BL21（DE3）菌种,并对阳性克隆的质粒进行DNA测序。检测不同条件下,IPTG诱导胰高血糖素-intein-几丁质结合结构域（CBD）组成的融合蛋白表达量,确定工程菌表达最适条件。利用几丁质结合柱进行亲和层析,在DTT作用下由intein在柱上进行自我切割,纯化胰高血糖素。SDS-PAGE检测融合蛋白表达量,SDS-PAGE在Tris-Tricine缓冲系统中电泳检测纯度,Lowry法检测蛋白质含量,Western blot检测免疫原性,升血糖实验检测活性并进行 N-末端测序。结果DNA测序显示表达产物基因序列正确,纯化胰高血糖素具有免疫原性和生物学活性,N-端15个氨基酸与天然产品相同,电泳呈单一谱带,产率为1.25mg/L。结论 获得分泌胰高血糖素基因工程菌,适于快速大规模生产。