三氧化二砷抑制淋巴瘤细胞株血管内皮生长因子表达的研究

目的 探讨三氧化二砷(ATO)对人类淋巴瘤细胞株内血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 应用实时荧光定量聚合酶链(Real-time PCR)技术及酶联免疫吸附(ELISA)法检测ATO作用前后淋巴瘤细胞株Raji及Jurkat内VEGF基因及其蛋白表达量的变化.结果 在ATO诱导淋巴瘤细胞株凋亡过程中,两种细胞未经ATO处理前均高表达VEGF mRNA(Raji加药2 μmol/L 12 h △△ Ct值0.75±0.15,Jurkat加药3.5 μmol/L 72 h △△ Ct值1.67±0.13)及VEGF蛋白(加药12 h,Raji198.38±4.37;Jurkat 563.11±3.81),且Jurkat细胞较Raji细胞的VEGF蛋白的表达量高;经ATO作用24、48、72 h后VEGF的mRNA表达量均较加药前明显减少(加药72 h △△Ct值,Raji:8.95±0.38;Jurkat:9.09±0.16),差异有统计学意义(t=3.54,P<0.01;t=3.65,P<0.01);同时蛋白表达量也较加药前明显减少(加药72 h,Raji:23.55±2.06;Jurkat:57.11±3.88),差异有统计学意义(t=2.48,P<0.05;t=2.59,P<0.05),且两者与药物作用时间明显相关,各时间点之间蛋白表达量差异均有统计学意义(F=2.47,P<0.05;F=2.50,P<0.05).结论 ATO通过阻断淋巴瘤细胞生长所需的血管条件,从而抑制淋巴瘤细胞的增殖.     

5-ALA介导的光动力治疗在耐药白血病中的作用机制研究

目的: 本研究观察了5-氨基乙酰丙酸介导的光动力治疗(ALA-PDT)对耐药白血病细胞株HL-60/ADR的杀伤作用及对耐药白血病原代细胞存活率的影响。方法: 以耐药白血病细胞株HL-60/ADR为实验模型, 同时在11例白血病患者原代细胞中进行检测。实验分为4组, 对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA＋PDT组。用MTT法测定细胞的存活率, 采用阳离子脂质荧光探针JC-1检测线粒体跨膜电位, 用Real-time PCR检测PDT前后HL-60/ADR细胞株中bcl-2基因及多药耐药基因MRP的表达变化。结果: ALA-PDT后HL-60/ADR细胞株线粒体跨膜电位出现快速下降, 0, 2, 4 h时线粒体跨膜电位崩塌的细胞比例分别升高至55.91%±2.60%、64.27%±1.08%、82.17%±0.43%, 与对照组相比皆有显著差异(P＜0.05), 呈时间依赖性。而单纯ALA组和单纯光照组则无明显变化。HL-60/ADR细胞株在ALA-PDT后Bcl-2和MRP基因均呈明显下降趋势。在初发和复发难治急性白血病原代细胞中ALA＋PDT组均显示较强的光动力效应。结论: ALA-PDT诱导的HL-60/ADR细胞的杀伤可能与其影响线粒体跨膜电位有关, 即通过影响线粒体功能促进细胞凋亡。同时表明ALA介导的光动力作用部分是通过在基因转录水平下调抗凋亡基因Bcl-2而促进凋亡的发生, 另一方面通过下调耐药基因MRP的表达而部分逆转耐药。同时ALA-PDT对原代白血病细胞同样有较大的抑制作用。     

β-羟基异戊酰紫草素二甲醚衍生物对白血病细胞株THP-1的作用

目的 选用人类单核细胞白血病细胞株THP-1,体外加入紫草素二甲醚衍生物5,8-二甲基-2-β-羟基异戊酰紫草素(SK36),研究其在THP-1细胞株增殖和凋亡中的作用,并对其作用机制进行初步探讨.方法 CCK法检测SK36对THP-1细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞早期凋亡标记Annexin V/PI及细胞凋亡通路Caspase活性;激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡和坏死.结果 流式细胞术检测结果显示,1.02μg/ml SK36作用24、48 h后的细胞凋亡率分别为(40.61±2.13)%和(67.40 ±9.15)%,明显高于对照组的(16.97±0.61)%,差异有统计学意义(t=18.444,t=9.528,P<0.01);SK36诱导THP-1细胞凋亡且经历了Caspase-3的激活(F=323.61,P<0.01).结论 紫草素二甲醚衍生物SK36能有效地诱导THP-1细胞凋亡,其作用机制主要是激活Caspase-3.     

ALA-PDT在耐药白血病细胞株HL-60/ADR中的实验研究

目的:本研究观察5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法(ALA-PDT)对耐药白血病细胞株HL-60/ADR的诱导凋亡作用.方法:以耐药白血病细胞株HL-60/ADR为实验模型.实验分为4组,对照组、单纯ALA组、单纯光照组及ALA PDT组.用MTT法检测细胞的存活率,瑞特染色观察细胞形态学改变,用双染法检测细胞凋亡率,并用共聚焦激光显微镜观察凋亡细胞的特征.结果:ALA PDT组光照后瑞特染色可见凋亡改变;MTT法显示细胞存活率明显下降,24h为(48.67±8.14)%,48h进一步降低至(22.23±6.07)%,两者比较差异有统计学意义;流式细胞仪检测显示细胞凋亡率3h、4h和24h分别为(6.35±1.40)%、(8.07±1.87)%和(57.66±7.55)%,与对照组相比差异有统计学意义;LSCM观察AnnexinV-FITC单阳性及AnnexinV-FITC/PI双阳性细胞均具有典型的凋亡特征,而单纯ALA组、单纯光照组及对照组则无上述改变.结论:ALA-PDT能灭活耐药白血病细胞株HL-60/ADR,主要通过诱导凋亡的方式实现的,并呈一定的时间依赖性.