鲢鱼肝脏中高分子CPIs提取方法的建立及其鉴定

研究了不同浓度的丝氨酸蛋白酶抑制剂(PMSF)、热处理条件及pH值对鲢鱼肝脏中高分子半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine proteinase inhibitors,CPIs)提取过程中的作用,根据其对CPIs在TSK液相上高分子质量部分的蛋白峰值和比活力(荧光合成肽底物法)的影响,确定了最佳粗提条件为:以含5 mmol/L的苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF),100mmol/L的Tris,3 mmol/L的EDTA(pH 7.5)作为提取缓冲液,而后在pH 8.7碱处理条件下经90℃加热5 min后,再回调到pH 7.0。用该法制备的鲢鱼肝脏CPIs粗提物经制备型Sephacryl S-200分子筛层析,分离得到的高分子活性部分,进一步经过反相酶谱法鉴定得到一种高相对分子质量的活性CPI,推测其可能是与某些蛋白结合形成了复合物,或是高分子CPIs的二聚体形式。     

建鲤组织蛋白酶L的克隆表达、纯化及活性特征鉴定

首先采用TA克隆技术克隆建鲤组织蛋白酶L（Cathepsin L,CAT L）成熟肽基因片段并进行双酶切鉴定,进而构建表达载体CAT L-p ET-30a并转入宿主菌E.coli BL21,经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）在37℃诱导2 h表达重组CAT L蛋白。而后经尿素梯度洗涤和镍离子亲和层析纯化目的蛋白,并利用SDS-PAGE检测诱导效果和纯化过程。最后以荧光合成肽底物（Z-Phe-Arg-MCA）测活法鉴定建鲤重组CAT L的热稳定性、p H稳定性,以及鱼糜生产和冻藏中常用添加剂对其活性稳定性的影响。双酶切鉴定结果表明成功克隆了目的基因片段,与鲤鱼CAT L基因序列相似性为99.11%。SDS-PAGE分析表明经诱导、尿素梯度洗涤及亲和层析后,成功获得高度纯化目的蛋白,分子量约28 ku。活性鉴定结果表明重组CAT L在20⁵0℃及p H3.0⁶.5范围内稳定;氯化钠、焦磷酸钠对重组CAT L活性的抑制作用呈现剂量依赖关系,而各浓度蔗糖、山梨醇则对其活性无明显作用。本研究成功克隆、表达和纯化了建鲤CAT L,并阐明了热、p H及鱼糜生产和冻藏中常用添加剂对该酶稳定性的不同影响。      

PDP时代何时到来

近年来，传统的显像管彩电、背投彩电都已经或即将发展到技术的极限，而高端的液晶显示电视因成本太高很难在近期普及，这时携大屏幕、清晰影像以及美观轻便等诸多优点脱颖而出的PDP电视越来越受到高端市场的关注。资料显示，2002年中国的PDP电视销量是1万台，到2005国内的PDP电视销量将达到8万台，业内人士分析认为，销量的大幅提高，是需要以降低售价为条件的，在三五年内等离子电视可降到现价的1／3。     

等温扩增技术在食源性致病菌检测中的研究进展

分子检测技术是致病菌检测的一种重要手段,具有精准度高、检测速度快的特点。近年来,随着分子生物学技术的不断发展,越来越多的等温扩增技术应运而生。目前常用于食源性致病菌检测的等温扩增技术包括环介导扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)、依赖核酸序列的扩增技术(Nuclear acid sequence-based amplification,NASBA)、链置换扩增技术(strand displacement amplification,SDA)、缺口依赖酶链置换扩增技术(nickase-dependent amplification NDA)、网状分支扩增技术(ramification amplification method,RAM)、依赖解旋酶扩增技术(Helicase-dependent isothermal amplification,HDA)以及重组酶聚合酶扩增技术(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)等。本文将对上述几种等温扩增技术的原理、应用现状、优劣势等进行综述。     

漂洗水中不同质量分数VB1对鲢鱼鱼糜冷藏品质的影响

分析用含不同梯度水平（0.01%、0.05%、0.10%和0.20%）VB1的漂洗水处理鲢鱼鱼糜对其冷藏品质的影响。结果表明：漂洗后,除0.20%组外,其他各处理组的鱼糜pH值均在6.5～7.5的近中性范围,白度与不含VB1的对照组鱼糜差异不显著（P＞0.05）,且具有正常鱼肉气味,无苦味。漂洗后（冷藏0 d）,各处理组鱼糜蛋白总巯基（the total sulfhydryl,TSH）和Ca2+-ATPase（CA）活性极显著（P＜0.01）高于对照组;表面疏水性（protein surface hydrophobicity,PSH）则显著（0.05＞P＞0.01）或极显著（P＜0.01）低于对照组。4 ℃冷藏期间,TSH和CA活性呈下降趋势,6 d时各处理组均显著（0.05＞P＞0.01）或极显著（P＜0.01）高于对照组;PSH呈上升趋势,6 d时除0.01%组外,其余各处理组均极显著低于对照组（P＜0.01）。鱼糜硫代巴比妥酸值冷藏4 d内无显著变化（P＞0.05）,6 d时显著上升（0.05＞P＞0.01）,但各处理组均极显著低于对照组（P＜0.01）。上述结果表明在漂洗和冷藏过程中,VB1可通过其抗氧化作用保护鱼糜蛋白免于氧化,延缓鱼糜冷藏品质下降,且综合各项指标,以含0.10% VB1的漂洗水处理鲢鱼鱼糜为佳。     

草鱼肝胰中CPIs初步分离鉴定及其活性测定

首先比较了偶氮酪蛋白(Azocasein)法和荧光合成肽底物法,在监测草鱼肝胰半胱氨酸蛋白酶抑制剂CPIs(cysteine proteinase inhibitors)活性时的适用性。进而通过凝胶过滤高效液相色谱法、反相酶谱和免疫印迹法,对草鱼肝胰中CPIs的分子量分布及可能的家族类型进行定性鉴定。结果表明在粗提液中加入丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂(40 mmol/L PMSF或0.4 mmol/L Pefabloc SC),或经90℃加热5 min,仅荧光合成肽底物法可准确地监测到CPIs活性的变化。液相色谱结果显示,草鱼肝胰中存在分子量(98、26、12、5~1 ku)不同的CPIs活性部分。但反相酶谱法仅能够判断其中大于20 ku的CPIs。而免疫印迹法证明存在约12 ku的Cystatin(家族II)类型CPIs,发现小于12 ku的显色条带,可能是该蛋白降解形成的低分子量的活性片段。      

精细到每一个像素——飞利浦“逐点晶晰”系列彩电

飞利浦公司去年底在国内推出采用Pixel Plus“逐点晶晰”技术的系列彩电。该系列彩电被飞利浦公司称作“将掀起彩电技术的第三次视觉革命”。如今的彩电市场,高端产品大多指高清晰的液晶、等离子和背投电视,低端市场大多还是传统的基于显像管技术的彩电。而飞利浦这次推出的“逐点晶晰”彩电,主要是在显像管技术(CRT)的基础上进行技术升级,由原来的逐行扫描晋升到逐点扫描,从而达     

精细到每一个像素

飞利浦公司去年底在国内推出采用Pixel Plus"逐点晶晰"技术的系列彩电.该系列彩电被飞利浦公司称作"将掀起彩电技术的第三次视觉革命".如今的彩电市场,高端产品大多指高清晰的液晶、等离子和背投电视,低端市场大多还是传统的基于显像管技术的彩电.而飞利浦这次推出的"逐点晶晰"彩电,主要是在显像管技术(CRT)的基础上进行技术升级,由原来的逐行扫描晋升到逐点扫描,从而达到等同于等离子技术的高清晰效果,价格上却低很多.