有机磷水解酶生物传感器载体固定化酶的研究

有机磷水解酶（OPH）传感器作为检测农产品中农药残留的新型检测装置,其酶的固定化对OPH传感器的灵敏度和稳定性有重要的影响。研究了几种酶固定化载体、孔径大小、固定方式、固定方法（试剂组成）对传感器pH值的影响。结果显示：采用孔径为0.45μm的硝酸纤维素膜制备固定化酶片的pH值要大于其余几种;采用浸泡方式制备固定化酶片的pH值明显大于传统的滴定法;采用牛血清白蛋白（BSA）、戊二醛交联固定的效果优于酶直接吸附法和BSA固定法,且当戊二醛体积分数为2.5％,BSA为10％时,酶固定化效果最好。     

农药残留生物传感器薄层电极制作工艺研究

为了开发农药残留生物传感器的薄层电极,研究尝试采用重复银镜反应和阳极氧化法制作参比电极;以1×10^-4mol／L对硝基苯酚为测定液,采用时间-电势法对制作参比电极的工艺参数进行优化,确定Ag电极制作工艺是银镜反应次数9次、面积98mm^2,Ag/AgCl电极制作工艺是阳极氧化3min、面积70mm^2。采用循环伏安法对电极所做的检测结果表明：电极间差异小于5％,具有很好的一致性;Ag电极适用电压为-1．35—1．15V,Ag／AgCl电极适用电压为-1．45～1．0V。     

短乳杆菌BS6 GlnR介导的氮代谢调控研究

短乳杆菌是乳酸杆菌属的重要菌种,被广泛应用于食品和医药行业。全局性转录因子GlnR普遍存在于各种细菌中,可以调控多个基因的表达。本研究从短乳杆菌(Lactobacillus brevis)BS6基因组扩增得到GlnR全长编码基因及包含GlnR盒的glnRA,amtB-glnK,glnPQ启动子序列,并运用细菌单杂交的方法证明GlnR在细菌体内可与上述3个操纵子的启动子结合,从而初步验证全局性转录因子GlnR在短乳杆菌氮代谢调控中的重要作用。     

一种高温酸性α-淀粉酶基因的高效表达和表达产物分析

一种高温酸性α-淀粉酶基因经密码子优化后在巴斯德毕赤酵母中得到了高效表达,表达的重组α-淀粉酶rBD5063具有α-淀粉酶的活性,表达量达到60mg／L。对rBD5063进行了纯化并对多组分的表达产物进行了研究。rBD5063作用最适pH值为5．0,在pH3．5～10．0范围内酶活性保留50％以上,最适温度在105～110℃之间,在90℃下酶活性半衰期约30min。低浓度Ca^2＋对激活rBD5063活性和维持稳定性是必需的,高浓度对活性会产生轻微抑制作用,Mg^2＋、SDS和Trition X-100都能够部分抑制rBD5063活性,Cu^2＋和EDTA严重抑制rBD5063活性。表达产物水解可溶性淀粉主要产物是单糖和低聚寡糖。表达产物包括分子量分别是62、56、44kD的3种活性组分,在通常情况下主要以大分子量活性多聚体的形式存在。重组α-淀粉酶rBD5063不存在N-连接的糖基化,但是存在O-连接的糖基化现象,O-连接对rBD5063的热稳定性和最适温度没有显著影响。     

来源于芽孢杆菌(Bacillus circulans)的乳糖酶在毕赤酵母中的高效表达

根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子选择偏好对来源于芽孢杆菌(Bacillus circulans)的乳糖酶基因lacO进行了分子改造.改造后的基因lacM按正确的阅读框架插入到毕赤酵母表达载体pPIC9上,构建得到重组毕赤酵母表达质粒.PCR检测、SDS-PAGE电泳分析和酶活力测定的结果表明,lacM基因已重组到酵母染色体上,并能正常分泌表达.与未改造的基因lacO的毕赤酵母重组子相比,酶蛋白表达量明显增加,约为改造前的3倍以上.