生菜中蜡样芽孢杆菌污染水平风险分析

研究生菜中蜡样芽孢杆菌的污染状况,并对蜡样芽孢杆菌可能引发的公共卫生风险进行初步评估,为选择合适的风险管理措施提供依据。筛查宝坻基地水培生菜、蓟州基地水培生菜、市售露地大棚生菜中蜡样芽孢杆菌的初始污染量及可能污染来源,结合居民对生菜食用习惯的膳食回顾性调查,采用@Risk 6软件评估最终食用时生菜中蜡样芽孢杆菌的含量。结果表明:蓟州基地水培生菜、宝坻基地水培生菜、市售露地大棚生菜的初始污染量平均水平分别为6.9×10~2、1.5×10~2、1.4×10~2 CFU/g,结合200份居民对生菜食用习惯的调研数据,应用@Risk 6软件经1 000次迭代模拟评估食用时蜡样芽孢杆菌含量超过中毒诊断限值10~5 CFU/g的概率分别为10.7%、12.3%、7.1%,且贮藏温度最终污染量/概率分布的相关性最大。蓟州基地水培生菜的可能污染来源为基质,宝坻基地水培生菜的可能污染来源主要为营养液,其次为基质。基地水培生菜的初始污染量较市售露地大棚生菜明显偏高,这与水培生菜的水床流通式栽培模式相关,建议基地水培生菜采取有效的风险管理措施,严格控制初始污染量及基质和营养液的环境交叉污染。依据现有生菜中蜡样芽孢杆菌初始污染量及居民食用习惯,建议居民购买生菜后,严格控制贮藏温度,可有效保证食用安全。     

应用通用引物量化检测鲜肉及其制品中羊源性成分

分别以牛、羊、猪、鸡、鸭、马线粒体细胞色素b基因为研究对象,设计羊源性成分特异性引物和探针,同时结合实时荧光定量PCR技术,引入16SrDNA内参基因校正羊种属特异性基因测定方法,建立快速、高通量的鲜肉及鲜肉制品中羊源性成分确证方法,实现科学准确的食品掺假量化判定技术体系。通过特异性、通用性及模拟混合样品的检测,对所建立方法进行验证。结果表明:建立的羊源性成分含量测定方法具有良好的特异性和通用性,且通过标准曲线的构建,呈现良好的线性关系均达0.996以上;通过羊种属特异性基因与16SrDNA内参基因Quantity值及校正系数,可以计算出样品中所含羊源性成份的质量百分比含量,经模拟混合样品的检测,回收率平均值到达96.25%,说明量化研究结果具有较高的准确性。     

应用焦磷酸测序技术快速检测食品中沙门氏菌

设计出适合特异性扩增引物和测序引物,采取焦磷酸测序技术对沙门氏菌invA毒力靶基因特异性序列分析,同时对焦磷酸测序反应条件进行优化,建立1种利用焦磷酸测序技术检测和鉴定沙门氏菌的方法。结果显示,此方法以传统国标法的前增菌为前提,可省去后期生化验证的繁琐过程,将检测时间由常规检测的4～7d缩短至20h,并且其准确性与传统生化验证完全一致。所建立的针对沙门氏菌的焦磷酸测序检测方法具有高效性、精准及操作简便等特点,适用于食品中沙门氏菌的快速检测。     

焦磷酸测序技术在4种食源性致病菌快速检测中的应用

为建立一种利用焦磷酸测序技术检测和鉴定沙门氏菌(Salmonellla)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和志贺氏菌(Shigella)的方法,通过对4种菌毒力靶基因特异性序列的同源性分析,设计出适合焦磷酸测序特异性扩增和测序的引物,摸索出最佳的焦磷酸测序反应体系和反应程序,并建立了4种食源性致病菌焦磷酸测序快速检测方法。此方法以传统国标法的前增菌为前提,而省去了后期生化验证的繁琐过程,大大缩短了检测时间,并且其准确性与传统生化验证完全一致,灵敏度可达10 CFU/mL。结果表明,作者建立的焦磷酸测序检测方法具有高效、快速、精准及操作简便等特点,为食源性致病菌的快速鉴定开辟了广阔的前景。     

乙型副伤寒沙门氏菌在鲜切黄瓜中的生长行为及预测模型建立

为建立不同温度条件下鲜切黄瓜中乙型副伤寒沙门氏菌的生长预测模型,将新鲜黄瓜切丁,添加乙型副伤寒沙门氏菌,分别在10、15、20、25、30和35℃下的恒温条件下贮藏,以观察细菌的生长。使用USDA综合病原体建模程序(USDA-IPMP)拟合每个温度下每种细菌的生长曲线,以找出描述该细菌生长的最适初级生长模型,并拟合得到最大比生长速率。通过温度对初级模型中最大比生长速率的生长动力学拟合,分别建立Ratkowsky、Huang rate、Cardinal、Arrhenius-type二级生长模型,并进行数学评估和实测样品验证。结果表明,实验数据和生长曲线显示乙型副伤寒沙门氏菌的生长表现出三个阶段,包括延滞期,指数期和稳定期。乙型副伤寒沙门氏菌的延滞期时间随着孵育时间的增加而降低。相反,乙型副伤寒沙门氏菌的生长速率随着孵育温度而增加,由此表明风险随温度的升高而增加。使用Baranyi和Huang初级模型分析两种病原体的生长曲线,使用Ratkowsky、Huang平方根模型、Cardinal和Arrhenius模型描述温度对贮藏时间细菌生长的影响,同时应用实验数据和样品实测验证评估所建立的预测模型。从该研究中获得的结果和预测模型可用于预测鲜切黄瓜产品中乙型副伤寒沙门氏菌的生长。     

肉制品中牛源性成分Taqman荧光定量PCR检测法的建立

本实验根据牛线粒体差异序列设计特异性PCR引物和Taqman探针,并基于16S rDNA内参基因设计通用引物及Taqman探针,绘制并通过标准曲线确定样品中总DNA浓度以及牛源性成分DNA浓度,采用相对定量法测定肉制品中牛源性成分的质量分数。并通过特异性、灵敏度实验,及混合肉样回收率及市售肉制品检测,对本方法进行验证。结果表明,方法特异性强,可对牛肉DNA进行特异性扩增。最低检出限为10 pg/μL,具有较高的灵敏度。并根据回收实验可知,平均回收率为98.62%。可以为肉制品中牛肉含量的测定提供技术参考。     

基于单拷贝核基因的数字PCR定量检测肉制品中羊源性成分

GeneBank搜索牛、绵羊、山羊、猪、马、驴、鸡、鸭、鹅、火鸡、狗、猫、鼠、兔、貂等15种动物的单拷贝核基因组序列信息,应用生物信息学分析筛选15种动物共有的种间保守区域,设计一对可同时扩增15种动物源性DNA的内参基因引物和探针;同时分析筛选绵羊和山羊共有且和其余动物种内特异性区域,设计一对只能扩增羊源性DNA的特异性基因引物和探针。基于微滴数字PCR技术,引入内参基因校正羊种属特异性基因测定方法,建立科学准确的肉制品中羊源性成分量化判定方法。结果表明,所建立方法具有良好的特异性和通用性,内参基因和羊种属特异性基因的最低检出限分别为32和26 copies/μL,模拟添加样品的正确度偏差均值为8.66%,符合数字PCR方法制定指南要求不得大于25%,说明量化判定方法结果具有较高的准确性。     

荧光定量PCR方法鉴别肉制品中羊源性成分

根据羊线粒体DNA细胞色素b基因序列,设计特异性引物和Taqman探针。通过反应条件的优化筛选,构建标准曲线,建立灵敏、可靠的肉制品中羊源性成分的实时荧光PCR鉴别方法。结果表明,所设计的引物可有效地进行肉制品中羊肉成分的鉴别,特异性强,灵敏度高达16pg/μL;标准曲线扩增效率达98.561%,R2=1,符合《实时荧光定量国际化标准-MIQE指南》要求;本研究建立的方法检测结果与国标GB/T 20190-2006方法结果符合率达100%,且不需电泳、酶切和测序等步骤。通过对市售肉制品样本的鉴别验证了方法的实用价值,为肉制品质量的有效控制提供了新的途径。     

分光光度法测定大麦苗粉中脱镁叶绿酸的含量

以建立测定叶绿素类产品中脱镁叶绿酸含量方法为主要目的,采用85%丙酮和乙醚萃取色素,经17%的盐酸溶液酸化后,用可见分光光度计测定667 nm下样品的吸光值,计算出脱镁叶绿酸的含量.结果表明:脱镁叶绿酸浓度在0.13mg/L～127mg/L范围内具有良好的线性关系,回归方程为Y=0.027 5X+0.002 5,R2=0.999 8.加样平均回收率为90.0%.     

食源性致病菌焦磷酸通用引物测序方法的建立

建立一种利用焦磷酸测序技术检测和鉴定沙门氏菌(Salmonellla)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和志贺氏菌(Shigella)的方法。通过对4种菌16SrRNA的保守序列可变区的同源性分析,设计出一套适合焦磷酸测序的扩增引物和测序引物,通过可变区位点差异,利用一套通用引物同时鉴别4种食源性致病菌,测序结果与数据库比对判断细菌种属。结果表明:建立的检测方法可在4 h内完成对4种菌的鉴定,测序鉴定结果与国标的传统生化方法完全一致,焦磷酸测序技术可用于食源性致病菌的检测和鉴定。