苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白基因vip3A的研究

根据已知vip3A基因序列设计一对特异性引物VIP3／VIP5,对218株Bt菌株进行PCR鉴定,有51株含有vip3A类基因,其中12株为不同亚种的标准菌株,有4株标准菌株不含有该基因。从Bt C9菌株中分离克隆了vip—C9基因,并插入表达载体pET—21b,转化大肠杆菌BL21,诱导表达出分子量88．6kDa的可溶性蛋白,表达产物对甜菜夜蛾和棉铃虫具有较高的杀虫活性,LC50分别为0．42ng／mg和25．95ng／mg,对小菜蛾活性较低。构建了缺失蛋白Vip—C9—N(N端去除39个氨基酸组成的信号肽序列),杀虫活性测定结果表明其对甜菜夜蛾的活性显著降低,说明N端39个氨基酸对甜菜夜蛾的活性是必需的。     

高产抗生素Zwittermicin A苏云金芽孢杆菌A164发酵条件的优化

从土壤样品中筛选出高产抗生素(Zwittermicin A)的苏云金芽孢杆菌菌株:A164,对此菌种的发酵条件进行了探讨。以A164合成高含量抗生素为目标对发酵培养的碳源、氮源、时间等条件进行了单因素优化;采用Plackett-Burman设计,确定发酵条件的重要影响因子,根据爬坡路径法,确定了各个因子的最适范围,采用响应面分析法对因子再次进行优化,得到了最佳发酵条件。最佳发酵条件为:蛋白胨含量17.56g.L-1,葡萄糖20.0g.L-1,MgSO40.18g.L-1,CaCl20.08g.L-1,ZnSO40.20g.L-1,K2HPO41.3g.L-1,培养温度28.31℃,发酵时间36h。     

几种常见Bt菌株中的ZwittermicinA活性比较

ZwittermicinA(ZwA)是一种水溶性抗生素,对微生物具有较强的抑制作用。以草生欧文氏杆菌为指示菌,采用抑菌圈法,检测了5种国际标准Bt菌株Bt22、Bt185、G03、HD-1和HD-73不同发酵时刻发酵液的抑菌效果,通过数据分析,确定菌株代谢产物ZwA的初始产生时间,及ZwA的最佳获得时间。结果表明,Bt185、G03、HD-1和HD-73四种菌株初始产生ZwA的时间差异不大,在20h左右,Bt22最晚,在28h;ZwA的最佳获得时间依次为Bt22(68h)HD-73(64h)=G03(64 h)Bt185(60 h)HD-1(52 h);在最佳获得时间时,Bt185产生的ZwA产量最高,为1.63 mg/mL,其它4种菌的ZwA产量依次为HD-73(0.96 mg/mL)Bt22(0.92 mg/mL)G03(0.89 mg/mL)HD-1(0.47 mg/mL)。