慢性粒细胞白血病ssDNA适配子PCR扩增条件的优化

目的优化慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)ssDNA适配子的PCR扩增条件。方法以合成的核苷酸适配子为模板并设计引物,根据引物解链温度(Tm值)设置不同的退火温度(38.0、39.2、41.2、44.2、48.3、51.5、53.6、55.0℃)、循环次数(12、16、20、24、28、30、35、38、40)及非限制性与限制性引物比例(1∶1、30∶1、50∶1、70∶1、80∶1、100∶1),进行PCR扩增,优化CML ssDNA适配子对称PCR及间接不对称PCR扩增条件,并验证优化的PCR条件的重复性。结果对称PCR扩增的最佳退火温度为44.2℃,最佳循环次数为30次;间接不对称PCR的最佳循环次数为38次,非限制性引物与限制性引物浓度比例为50∶1时,可获得理想的ssDNA和较少的dsDNA;优化的PCR条件重复性较好。结论优化了CML ssDNA适配子的PCR扩增条件,为筛选到特异性的ssDNA适配子提供了参考,也为后续试验奠定了基础。     

PageRank技术在智能系统中的应用

知识获取是智能系统发展的关键技术.本文分析了PageRank技术特点,采用PageRank技术解决智能系统中知识获取的效率问题,把改进了的PageRank技术应用于智能系统中,并构建一个简易的问答系统来验证PageRank技术的作用.     

南京中山陵地下商场主体围护结构方案探讨

根据南京中山陵地下商场地质、水文条件,对其主体围护结构分别采取了放坡开挖方法、土钉墙+锚杆方法以及人工挖孔灌注桩+锚杆方法进行设计,并从技术、经济角度对上述方法进行比较分析,针对一些相关问题提出了看法,可为同类工程提供技术参考。     

抑制新城疫病毒繁殖的九肽及其突变体基因的克隆与原核表达

目的克隆并表达抑制新城疫病毒(NDV)繁殖的九肽(Nonapeptide)及其突变体基因。方法设计并合成Non-apeptide2串联体及其突变体基因,克隆于质粒pUC18,经酶切回收目的基因,与经相同酶切的表达载体pGEX-4T-1连接,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性菌落,抽提质粒进行鉴定。IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果重组表达质粒经双酶切、PCR及测序鉴定,证明构建正确。阳性重组菌的诱导表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量约29000处可见一明显条带,与理论值相符。Nonapeptide 2及其突变体蛋白的表达量分别占菌体总蛋白的41%和37%。Western blot结果显示两种蛋白均具有良好的反应原性。结论已成功克隆并表达了抗NDV繁殖的Nonapeptide及其突变体基因。     

一种基于s-DOM的XML文档索引算法

改造XML树模型是提高XML查询效率的重要方法。通过分析现有的索引算法,对XML树模型进行了改造,提出了基于Signature的索引策略(s-DOM)。采用该策略预处理XML文档可以大大缩小搜索范围,从而提高了查询的效率。     

构建校园网的电子邮件系统的设想

本从网络结构、域名系统到邮件系统以及DNS服务器的设置,简要介绍了如何构建学校网的电子邮件系统。     

亚胺唑在梨上的残留行为及膳食风险评估

[目的]研究亚胺唑在梨上的残留行为,并进行膳食风险评估,建立了梨中亚胺唑的残留检测方法.[方法]样品经乙腈提取,C18净化,利用超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱仪(UPLC-MS/MS)检测.[结果]在0.001 ～1.0 mg/L范围内,亚胺唑的线性关系良好,R2为0.9981(R2＞0.99);在0.005、0....     

优化C60高强度泵送混凝土的配合比设计

本文在确定C60高强泵送混凝土的设计要求后,充分利用宁波地方特色的建筑材料,引入了多指标等水平的正交设计方法,通过重复性试验对混凝土的塌落度、收缩率、强度塌落度损失等指标进行验证,达到预期的要求。     

牛乳铁蛋白十肽的基因改造、克隆及表达

目的克隆并表达牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因。方法参照大肠杆菌偏爱密码子,分别针对牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,设计并合成两个具有相同黏性末端的DNA片段,同时在其基因前后分别加上天冬酰胺和甘氨酸的密码子,构成羟胺裂解位点,通过连接获得其二拷贝基因同向串联体。分别将该串联体克隆至载体pUC18上,经双酶切、PCR及测序鉴定后,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物纯化后,用凝血酶切割及羟胺裂解。结果获得了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2二拷贝基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出相对分子质量约29000的目的蛋白条带,纯化后的蛋白经凝血酶切割后,相对分子质量约29000的目的蛋白条带消失。结论已成功克隆并表达了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,为基因工程抗真菌肽的制备奠定了基础。     

浅析网络称呼语“亲”的泛化

本文分析了网络称呼语＂亲＂的起源、发展,并结合社会语言学理论对此现象作了深入分析,对这一称谓的未来发展态势做出了预测。