新型高抗草甘膦N-乙酰转移酶基因的分离及其在大肠杆菌中的表达

利用草甘膦极端污染土壤总DNA,构建了元基因组文库,筛选到一个高抗草甘膦的N-乙酰转移酶(N-acetyltransferase,GAT)基因,并利用原核表达系统对该基因进行了功能鉴定,发现其在大肠杆菌BL21中能耐受高达300 mM的草甘膦.研究结果为进行N-乙酰化途径高抗草甘膦机理研究和新型高抗草甘膦转基因作物的开发提供了理论基础.     

高效降解苯胺的菌株AD9的分离、生理生化特性分析和分子鉴定

从活性污泥中分离到一株能以苯胺为唯一碳源、氮源生长的苯胺降解菌株AD9,该菌株最适生长的苯胺浓度为1000mg／L,降解效率可达90％,对苯胺耐受程度高达4500mg/L,降解苯胺的最适pH值为7．0,最适温度为30℃。以上实验结果表明,AD9具有降解苯胺速率快、耐受苯胺浓度高的特性。该菌具有氨苄青霉素、卡那霉素和利福平抗性,无氯霉素、四环素抗性,其16SrDNA序列与多株Delftia sp．菌有很高的同源性,其G＋C含量为66．8mol％,非常接近于标准菌株D．tsuruhatensis T7（66．2mol％）。另外该菌和17的DNA-DNA杂交率为83．8％。结合AD9的表型鉴定将该菌株归属为D．tsuruhatensisas。这是D．tsuruhatensis菌种苯胺降解细菌菌株的首次报道。     

固氮斯氏假单胞菌四碳二羧酸转运调控基因dctB的功能研究

为研究固氮斯氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）A1501四碳二羧酸转运相关基因dctB的生物学功能,构建了携带功能完整的dctB基因片段的广宿主质粒pLL2922,通过三亲接合将该质粒转移至dctB突变株及野生型菌株A1501,并对其以琥珀酸、延胡索酸、苹果酸等四碳二羧酸为唯一碳源的培养基中的生长情况与固氮活性进行了测定。结果表明：dctB突变株不能利用琥珀酸和延胡索酸进行生长和固氮,但能以苹果酸为唯一碳源进行生长和固氮。携带功能完整dctB的广宿主质粒pLL2922,可以互补dctB位点的突变,并部分恢复突变株的四碳二羧酸转运和固氮能力。将该质粒转入A1501野生型菌株可以提高A1501的固氮活性,在琥珀酸,延胡索酸,苹果酸为唯一碳源的培养基上固氮活性比野生型菌株提高62．8％,33．9％,27．8％。表明dctB基因对于四碳二羧酸的转运及固氮能力均具有重要作用。     

醋酸钙不动杆菌PHEA-2的16S rDNA测序及其苯酚降解特性研究

从我国东北某炼油厂工业废水中分离到一株高效降解苯酚的菌株ＰＨＥＡ－２,采用ＰＣＲ技术从该菌总ＤＮＡ中克隆到１５００ｂｐ的１６Ｓ ｒＤＮＡ片段。该片段的核苷酸序列分析结果表明,ＰＨＥＡ－２的１６Ｓ ｒＤＮＡ核苷酸序列与醋酸钙不动杆菌模式菌株的同源性为９８％。在细菌系统发育分类学上,ＰＨＥＡ－２归属变形细菌γ亚类中的不动杆菌属,醋酸钙不动杆菌,ＰＨＥＡ－２除了能够降解苯酚外,还能降解苯甲酸盐和邻苯二酚     

一株草苷膦极端抗性菌株的分离和分子鉴定

从极端污染的土壤中 ,分离到一株对草苷膦有极端抗性的细菌菌株HTG7。它能够在以草苷膦为选择压力的限制性培养基上生长 ,其最高耐受能力为 5 0 0mmol/L。采用PCR扩增获得该菌 16SrDNA片段。核苷酸序列分析表明 ,该菌的 16SrDNA核苷酸序列与盐单胞菌属同源性最高 ,在 95 %～ 98%之间。在细菌系统分类学上 ,HTG7归属盐单胞菌属Variabil。     

转dct结构基因固氮斯氏假单胞菌工程菌株构建及其特性研究

固氮斯氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)A1501是一种定殖于水稻根部的联合固氮菌。将含有A1501四碳Z-羧酸转运系统(Dct-transport system)结构基因dctPQM的亚克隆大片段克隆到具有广泛宿主范围转移特性的质粒载体pSZ21上。通过三亲接合试验，重组质粒pSZY6中所携带的dctPQM基因随机转座插入到菌株A1501的染色体基因组中，构建了含有额外拷贝dct结构基因的遗传212程菌株。在A15卡那霉素(50μg／mol)平板上，共筛选到约60株转接合子。其中工程菌株A-136、A-115和A-142在以不同的四碳二羧酸如琥珀酸、延胡索酸和苹果酸，以及乳酸为唯一碳源生长时，表现了较高的固氮活性，其固氮水平明显高于野生型菌株A1501。     

氯代芳香族污染物生物降解菌株的分离及其降解质粒的初步研究

从工业废水污染的水体和污泥中,分离并筛选到６株对氯苯和苯酚类有机污染物高浓度耐受力的细菌菌株。６株降解细菌能在氯代苯和氯代酚作为唯一碳源的培养介质中生长,具有不同程度降解这类有机污染物的代谢能力,除２号和５号菌外,所筛选的其它４株降解细菌均含有一个或多个质粒。采用２,４－Ｄ单加氧酶基因ｔｆｄＡ的保守引物和ＰＣＲ扩增技术,证明在２号和６力的染色体和３号菌的大质粒上含有ｔｆｄＡ基因的同源序列。