应用PCR-DGGE技术分析长江口低氧区的细菌群落组成

应用PCR结合变性梯度凝胶电泳（PCR-DGGE）技术对长江口外低氧区的细菌群落组成和优势菌群进行了分析。对25条DGGE条带进行了克隆、测序,所得到的细菌16SrDNA基因V3区序列进行了系统进化分析。结果显示这25条条带分别归属于4个细菌类群：变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroides）、厚壁菌门（Finnicutes）和蓝细菌门（Cyanobacteria）。其中有16条分别与变形细菌亚群的γ-Proteobacteria和δ-Proteobacteria相似。时空分析发现,低氧水体的细菌群落组成与非低氧水体的组成不同,低氧水体包括变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroides）、厚壁菌门（Finnicutes）和蓝细菌门（Cyanobacteria）,非低氧水体中没有发现蓝细菌门（Cyanobacteria）。并且8月份低氧水体中Flavobacteria为优势菌群。     

鳗弧菌灭活疫苗对海水养殖大菱鲆的免疫预防研究

福尔马林灭活的鳗弧菌疫苗分别以浸泡、注射接种的方式对海水养殖大菱鲆鱼苗进行免疫 ,定期检测血清中特异性抗体。 4周后用鳗弧菌悬液 (3.7× 1 0 8cfu/ml) 0 .2ml腹腔注射感染免疫鱼。结果表明 ,灭活鳗弧菌疫苗用 2种方式免疫后都能刺激大菱鲜产生特异性免疫反应。其中注射免疫组在 1周后即可产生特异抗体 ,在 6周内一直呈上升趋势 ,最高达 1 2 2 8.8,免疫 4周后人工感染后的免疫保护力为 91 .70 %。浸泡免疫组在 3周后才产生抗体凝集价 ,凝集抗体效价最高 36 ,免疫保护力为 33.30 %。     

海洋哈维氏弧菌溶血素蛋白在酵母菌细胞表面上的展示及其活性的测定

为制备以酒精酵母为载体的基因工程疫苗,参照其Genbank中基因序列设计一对引物,PCR扩增得到预期长度的产物,双酶切插入用于酒精酵母表面展示的穿梭质粒载体pYD1,转化大肠杆菌TOP10,提取阳性质粒转化酒精酵母菌株EBY100,诱导表达后,用免疫荧光和流式细胞仪检测外源蛋白的表达,结果测得最佳诱导时间为36～48h,诱导培养后约30.0%左右的酵母细胞表达外源蛋白;同时以EBY100和转空质粒的酵母菌株为对照,测得诱导培养后的阳性酵母转化株的细胞对牙鲆鱼血细胞具有溶血活性,以此酵母活细胞分设高中低三个浓度组,腹腔注射养殖牙鲆幼鱼,检测其毒性,结果表明此重组酵母对牙鲆是安全的.该研究为下一步鱼用活载体疫苗免疫效果的研究奠定了基础.     

青岛汇泉湾海洋趋磁细菌多样性研究

在青岛汇泉湾沿岸沉积物中发现了大量海洋趋磁细菌,最大丰度可达105 个/cm3.透射电镜观察发现该菌菌体形态多样,有球形或卵球形、长短杆状、弧状和螺旋状,其中球形或卵球形趋磁细菌占绝对优势.电镜观察还发现该菌磁小体的排列方式多样化,大多数呈链状排列,有单链、双链及多链,还有的呈环状或者成簇排列.磁小体的形态也多种多样,有正方体、棱柱体、立方八面体、子弹头状、片状和齿状.用RFLP方法分析了70个克隆测序,得到10条不同序列.经16S rRNA系统发育分析,发现9个属于α-变形菌亚纲,1个属于γ-变形菌亚纲,共有8个不同的属,优势种属于未培养的海洋趋磁球菌.所有菌株与最接近的海洋趋磁球菌的相似性并不高(76.4%～89.4%),表明该海区的趋磁细菌为新发现的微生物资源.