土豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及其活性包涵体分析

目的 克隆、表达土豆环氧化物水解酶基因,分析其活性包涵体.方法 提取土豆总RNA,以反转录获得的cDNA为模板进行聚合酶链式反应(PCR),扩增得到土豆环氧化物水解酶基因,构建大肠杆菌表达质粒pET-REH,将重组表达质粒pET -REH转化E.coli BL21(DE3).结果 SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导表达的重组土豆环氧化物水解酶在各种温度下均主要以包涵体形式表达,只在15℃有微量可溶表达.酶活性分析表明,28℃表达的重组酶包涵体酶活性性为0.7 U/mg.结论 初步证实了存在活性包涵体的观点.     

18型人乳头瘤病毒E6蛋白截短体(HPV18 E6*)的基因克隆与表达

目的 构建HPV18 E6*原核重组表达质粒,并优化其蛋白表达条件.方法 以人宫颈癌HeLa细胞cDNA为模版,PCR扩增HPV18 E6*基因,构建重组表达载体HPV18 E6*-pET28a,在大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达重组蛋白,并优化其表达条件,SDS-PAGE检测重组蛋白表达状况.结果 成功构建了重组表达载体;37℃表达,HPV18 E6*以不溶包涵体为主,表达量占菌体总蛋白的20％左右;15℃主要为可溶形式;包涵体变复性获得纯蛋白.结论 HPV18 E6*蛋白的高效表达为研究其蛋白作用机制及为研究预防和治疗子宫癌奠定基础.     

超大型散货船总振动计算及动力响应预报与控制

采用有限元法对209000 DWT Newcastle-Max型散货船的船体梁振动特性和上层建筑在主机激励下的强迫振动响应进行数值分析。重点研究船体梁振动力学模型建模、主机机架振动计算和不平衡力矩加载等关键技术,对典型减振装置--平衡补偿器和顶部支撑的减振效果进行评估。计算表明,该船采取的减振措施效果显著,振动性能满足ISO 6954的振动评价标准。     

土豆环氧化物水解酶基因的克隆、表达及其活性包涵体分析

目的克隆、表达土豆环氧化物水解酶基因,分析其活性包涵体。方法提取土豆总RNA,以反转录获得的cDNA为模板进行聚合酶链式反应(PCR),扩增得到土豆环氧化物水解酶基因,构建大肠杆菌表达质粒pET-P.EH,将重组表达质粒pET–P.EH转化E.coli BL21(DE3)。结果 SDS-PAGE分析表明,IPTG诱导表达的重组土豆环氧化物水解酶在各种温度下均主要以包涵体形式表达,只在15℃有微量可溶表达。酶活性分析表明,28℃表达的重组酶包涵体酶活性性为0.7 U/mg。结论初步证实了存在活性包涵体的观点。