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抗稻瘟病新基因pi-hit-1的克隆与功能研究 总被引:3,自引:0,他引:3
采用差异显示法(DD-PCR)寻找易感稻瘟病的突变品系与野生型对照品系中的差异表达基因。结果发现与野生型对照相比,Rubisco小亚基、pi-hit.1(AF450251)和pi-hit-2(AF448491)基因在易感稻瘟病的突变品系中高表达,pi-hit-1和pi-hit-2是功能未知的新基因。进一步采用电子克隆和RT-PCR方法克隆了pi-hit-1基因的全长eDNA(AF514859),该基因编码的蛋白质属于ATP依赖的Clp蛋白酶家族。分析pi-hit-1基因的组织特异性表达发现,此基因在叶片组织特异表达。进一步设计接种诱导实验研究pi-hit-1基因表达与水稻稻瘟病易感性的关系。在易感稻瘟病的突变品系中pi-hit-1受稻瘟病菌诱导,接种后其表达量明显升高,而野生型对照品系pi-hit-1基因表达在接种前后无明显变化。比较易感稻瘟病的突变品系与对照品系pi-hit-1基因序列差异发现,稻瘟病敏感品系中pi-hit-1基因第一外显子发生缺失突变使pi-hit-1蛋白功能缺失,导致突变品系易感稻瘟病。这些实验结果提示野生型pi-hit-1是稻瘟病抗性基因。 相似文献
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影响球毛壳菌原生质体转化的因素 总被引:2,自引:0,他引:2
采用PEG介导的原生质体转化法研究了含有多菌灵抗性基因的质粒pRBl29转化球毛壳菌的影响因素.结果表明,最佳转化条件为:以1.0mol/L山梨醇作为渗透压稳定剂,20mmol/L Ca^2 和终质量分数为50%的PEG4000作为转化介质,于25℃转化10min,采用缓慢逐步稀释的方法,转化后l.5d筛选转化子,此时,转化率最高,且有较高的重复性,DNA平均转化率为5.6个/μg.该结果对球毛壳菌其他性状的改进及其他丝状真菌的遗传转化具有重要参考价值. 相似文献
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采用 PEG 介导的原生质体转化法研究了含有多菌灵抗性基因的质粒 pRB129转化球毛壳菌的影响因素.结果表明,最佳转化条件为:以1.0 mol/L 山梨醇作为渗透压稳定剂,20 mmol/L Ca~(2+)和终质量分数为50%的 PEG4000作为转化介质,于25℃转化10 min,采用缓慢逐步稀释的方法,转化后1.5 d 筛选转化子,此时,转化率最高,且有较高的重复性,DNA 平均转化率为5.6个/μg.该结果对球毛壳菌其他性状的改进及其他丝状真菌的遗传转化具有重要参考价值. 相似文献
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