酵母双杂交技术研究进展

酵母双杂交技术是一咎有效的真核活细胞内研究方法,在蛋白质相互作用的研究方面得到了广泛的应用并取得了许多有价值的重要发现,作为一个完整的实验系统,它自建立以来经过了不断的改进与完善,不仅进一步提高了实验结果的可靠性与精确性,而且在此基础上又发展了反向双杂交,三杂交及核外双杂交等多项技术。这些都将对功能基因组学和蛋白质组学的研究起到促进作用。     

脆壁克鲁维酵母KFade5，7基因的克隆及其5′非编码区结构与功能研究

通过补偿乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)KlADE5，7基因突变，从脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)基因组文库中克隆了KfADE5，7基因。该基因全长4975bp，编码793个氨基酸，氨基酸序列与已知的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ScADE5，7基因编码区有68．3％的同源度。利用KfADE5,7-lacZ融合基因，对5′非编码区进行缺失分析，发现了具有完整启动子功能的区域，在启动子上游还发现了两个增强转录和两个减弱转录的区域。     

“三全育人”理念下二级学院教学管理的创新

为了提升高校思想政治教育工作成效和促进学生健康成长,必须在高校的教育管理工作中加入三全育人的理念,形成一个以学校、家庭及社会的全员育人主线,从学生进入大学到毕业这个过程中对其进行全方位的育人工作,从而确保大学生的综合能力得到提升。分析高校"三全育人"的背景,从二级学院教学管理创新的必要性、创新内容和创新路径三个角度,探讨二级学院教学管理工作的创新。     

人凝血因子IX在脆壁克鲁维酵母中的表达与分泌

通过改造人凝血因子IX基因(h-FIX)使其与乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)的分泌信号序列(Kss)融合，并置于脆壁克鲁维酵母(K．fragilis)LAC4基因调控型启动子的控制之下，构建成h-FIX基因表达盒。将此表达盒插入克鲁维酵母的整合质粒，得到了一个高稳定的h-FIX基因整合表达载体pHKB202-FP。经摇瓶培养并以半乳糖诱导此表达载体转化的酵母菌株，ELISA检测显示酵母上清液中的人凝血因子IX表达量可达到约200ng/ml。此结果表明人凝血因子IX蛋白首次成功地在脆壁克鲁维酵母中得到了表达和分泌。这对于促进人凝血因子IX的基因工程产业化具有实际意义。     

脆壁克鲁维酵母KfADE5,7基因的克隆及其5''''非编码区结构与功能研究

通过补偿乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)KlADE5,7基因突变,从脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)基因组文库中克隆了KfADE5,7基因.该基因全长4975bp,编码793个氨基酸,氨基酸序列与已知的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ScADE5,7基因编码区有68.3%的同源度.利用KfADE5,7-lacZ融合基因,对5'非编码区进行缺失分析,发现了具有完整启动子功能的区域,在启动子上游还发现了两个增强转录和两个减弱转录的区域.     

脆壁克鲁维酵母KfPDI基因高表达菌株的构建

通过构建脆壁克鲁维酵母（Kluyveromyces fragilis）蛋白二硫化物异构酶基因KfPDI强表达单元并克隆到不同类型的酵母载体上转化酵母菌株,经筛选得到了带有不同拷贝数KfPDI基因的酵母转化子。酶活性测定结果表明这些转化子中的蛋白二硫化物异构酶表达水平不仅与其KfPDI基因拷贝数有关,而且与该基因是否整合入宿主染色体也密切相关。本文所得到的KfPDI基因高表达菌株有望作为增强外源蛋白正确折叠和分泌效率的基因工程宿主菌。     

一个具有启动子功能的酵母DNA自主复制起始区

对乳酸克鲁维酵母（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ ｌａｃｔｉｓ）天然线性双链ＤＮＡ质粒ｐＧＫＬ１中一个有自主复制起始功能的６３８ｂｐ片进行了研究。序列分析结果显示该片段中存在两个高度保守的酵母ＡＣＳ（ＡＲＳｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）序和多个ＡＲＳ－ｂｏｘ序列。缺失突变分析表明该片段的自主复制功能与其ＡＣＳ密切相关。并且证实它的两个ＡＣＳ都有功能，可以各自独立发挥作用。据此提出１０ｂｐ序列（