利用斑马鱼模型研究琼胶寡糖抗氧化机制

为进一步实现琼胶寡糖的高值化利用,探究琼胶寡糖(Agaro-oligosaccharides,AOS)对2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(AAPH)诱导损伤后斑马鱼的抗氧化作用及机制。采用高效液相色谱法对酸法制备的琼胶寡糖组分进行分析。优化建立AAPH诱导的斑马鱼模型,并以斑马鱼胚胎存活率、活性氧生成率和细胞死亡率评价不同浓度琼胶寡糖的抗氧化活性。结果表明,琼胶寡糖主要由琼二糖(51.60%)、琼四糖(28.40%)和琼六糖(14.50%)组成,对斑马鱼胚胎添加琼胶寡糖浓度低于200 μg/mL时无致畸、致死毒性;琼胶寡糖(25、50、100 μg/mL)对最优AAPH诱导浓度(15 mmol/L)引起的氧化应激损伤斑马鱼模型有保护作用,且呈剂量依赖性。其中最优浓度100 μg/mL 琼胶寡糖能显著提高斑马鱼胚胎存活率(96.88%,p<0.05),显著降低AAPH引起的斑马鱼体内活性氧生成率(100.53%,p<0.05)和细胞死亡率(101.69%,p<0.05)。本研究通过斑马鱼模型首次揭示了琼胶寡糖可通过清除体内大量活性氧生成和阻止细胞死亡损伤的抗氧化机制实现提高其体内抗氧化活性,为其作为保健功能食品等应用提供了理论基础。     

紫菜自由丝状体SCAR标记的获得

应用RAPD技术对27个紫菜自由丝状体材料进行遗传多样性分析，获得7个紫菜材料的7个特异标记。对这7个特异片段进行了回收、克隆，对其中5个片段已完成了序列测定，根据这5个序列的两端顺序合成了5对SCAR—PCR引物，经过优化PCR反应条件成功地将紫菜材料Porphyra tenuipedalis的RAPD扩增片段OPZ-19140和P．yezoensis qd-8的RAPD扩增片段OPJ-18488转换成两个SCAR标记。因为这两个标记的序列已全部测通，故又称为STS标记。这两个SCAR标记(STS标记)可以作为紫菜P．tenuipedalis和P.yezoensis qd-8自由丝状体材料种质鉴定、优良品系选育和产权保护的分子标记。     

龙须菜(Gracilaria lemaneiformis)选育品系遗传背景的RAPD分析

在优化的RAPD反应条件下,筛选出30条随机引物,用于龙须菜野生型青岛一个群体和选育品系福建莆田、江苏连云港、山东荣成3个栽培群体的DNA多态性分析,共扩增出263条DNA片段。龙须菜野生型青岛群体和选育品系的山东荣成栽培种群的平均杂和度为0．160,0．120,多态位点比例为40．68％,32．32％;两群体问的遗传距离为0．1136,遗传相似性为0．8926。福建莆田、江苏连云港、山东荣成3个栽培群体的平均杂和度为0．141,0．123,0．120,多态位点比例为36．50％,33．08％,32．32％;山东荣成／福建莆田,山东荣成／江苏连云港,福建莆田／江苏连云港栽培群体间的遗传距离分别为0．1358,0．1425,0．0722,遗传相似率分别为0．8730,0．8672,0．9303。研究结果表明,龙须菜选育品系来源于野生型青岛群体,其快速生长的品系特征和遗传物质基础在不同海区环境保持相对稳定;龙须菜野生型青岛群体的遗传变异水平高于选育品系群体,选育品系的变异水平随着栽培海区由北方向南方呈现增加的趋势。     

利用LPS诱导胚胎期斑马鱼炎症模型研究羊栖菜多酚抗炎机制

为研究羊栖菜多酚对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导的斑马鱼的抗炎作用及机制,本文优化了LPS诱导斑马鱼炎症模型,并以卵黄囊大小、心跳速率、NO生成率、细胞死亡率和活性氧(ROS)生成率等指标比较了不同浓度羊栖菜多酚的抗炎活性。结果表明,羊栖菜多酚(50、100、200 μg/mL)对最优LPS诱导浓度(8 μg/mL)引起的炎症斑马鱼有保护作用,且呈剂量依赖性。多酚浓度为200 μg/mL时表现最优,显著降低心跳速率(102.56%,P<0.05)和卵黄囊大小(109.18%,P<0.05),NO生成率、细胞死亡率和ROS生成率分别由202.48%、168.45%和353.44%降至75.62%、101.25%和128.91%。本研究首次通过斑马鱼模型揭示了羊栖菜多酚的体内抗炎作用,为其在保健食品和化妆品中的应用提供了理论基础。