小麦与高冰草体细胞杂种耐盐新品系的盐胁迫应答cDNA差异表达分析

用银染DDRT-PCR技术分析了小麦济南177和小麦与高冰草体细胞杂种耐盐品系杂3号在盐胁迫前后基因的差异表达情况。并通过反向Northern杂交筛选,获得27个阳性片段。从中选出10个候选片段进行序列分析,这些序列信息表明,其表达与盐胁迫应答有一定关系。Northern杂交验证了差异片段wrsi-1在耐盐品系杂3号的根中受盐诱导,可能为胁迫早期应答基因。     

优质小麦体细胞杂种中一种新的HMW麦谷蛋白亚基基因cDNA的克隆和测序

研究了在小麦(Triticun acetivum L．)与高冰草(Agropyron elngatum(Host)Neviski)不对称体细胞杂种优质株系Ⅱ-1．3中出现的迁移率与优质小麦高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)一致的1B16亚基,通过Westem blot杂交证明了该亚基与普通小麦的1By16亚基有很强的杂交信号。依据Ⅱ-1-3中类似16亚基N端15个氨基酸序列设计简并引物,通过RT．PCR扩增Ⅱ-1—3 F4中未成熟胚种子总RNA,得到三条特异带(2．3、2．2、2．11kb),对其中分子量最大的一条2．3kb带谱进行了克隆、测序。该序列(p16BL-1,测序编号为473)长2298bp,包括2137bp的编码区和161bp的3’非编码区。同源性分析发现,该片段与普通小麦HMW Glu-IR、Glu1BY9同源性较高。利用RNA二级结构预测软件对该片段、GlulR和GlulBy9进行预测表明,所分离的基因片段为一新的HMW-麦谷蛋白基因。该片段所编码的氨基酸序列中,N端的99个氨基酸和C端的42个氨基酸均为典型的HMW麦谷蛋白保守区。中间重复区中6肽重复22个,9肽重复7个。通过对其蛋白质二级结构的预测发现,在460～470氨基酸附近比GlulR和GlulBy9多一个α螺旋区和一个转角。该片段在Genbank中的编号为AY249141,所翻译的蛋白序列编号为AA074630。本文揭示了体细胞杂交引起小麦基因序列变化及与体细胞杂种小麦优良品质的相关性,为小麦品质育种研究提供了新途径。